كشف أسرار استخلاص البلازميد عالي الجودة

يعد استخلاص البلازميد أمرًا بالغ الأهمية للباحثين. وباعتبارها ناقلات جينية، فإن البلازميدات حيوية في أبحاث اللقاحات والعلاج الجيني، حيث تكون الجودة مهمة. تشمل عوامل الجودة الرئيسية نسبة الالتواء الفائق ومحتوى السموم الداخلية. تختلف اللوائح: FDA ≥80%، SMPA ≥85%، NMPA ≥90%، مع <5% DNA خطي/دائري مفتوح. غالبًا ما يفضل العملاء ≥95% الالتواء الفائق. مستويات السموم الداخلية هي: البحث (>50 EU/µg)، والتحويل الجيني (<50 EU/µg)، وخالية من السموم الداخلية (<0.1 EU/µg).

الحمض النووي البلازميدي فائق الالتواء

تتضمن البلازميدات من Escherichia coli الحمض النووي الملفوف للغاية (SC) والدائري المفتوح (OC) والخطي (L). تعمل نسبة SC العالية على تعزيز كفاءة النقل والتعبير. على سبيل المثال، يكون نقل البلازميد بنسبة 85.45% في SC أعلى بمقدار 2.5 مرة، ويكون التعبير عن HGF في البلازميد بنسبة 93.28% في SC أعلى بمقدار 1.8 مرة، مما يؤكد تفوق الحمض النووي SC.

الحمض النووي الدائري المفتوح: عندما ينكسر أحد خيوط الحمض النووي ثنائي السلسلة، يصبح الهيكل الملفوف فضفاضًا، مما يشكل بلازميدًا دائريًا مفتوحًا بحجم أكبر يهاجر بشكل أبطأ أثناء الرحلان الكهربائي ويقع في الأعلى.

الحمض النووي الخطي: عندما ينكسر كلا سلسلتي الحمض النووي البلازميدي، يتشكل هيكل خطي، بحجم أصغر نسبيًا يهاجر بشكل أسرع من الحمض النووي الدائري المفتوح ولكن أبطأ من الحمض النووي الملتف للغاية، ويوضع في المرتبة الثانية.

الحمض النووي الملتف للغاية: يتشابك حلزونان، ويلتفان في بنية ملتفة للغاية تعتمد على حلزون الحمض النووي. وهو أصغر حجمًا وينتقل بسرعة أكبر أثناء الرحلان الكهربائي، ويقع في الأسفل.

التحليل الكمي لنسبة الالتواء الفائق

تستخدم المختبرات تقنية الرحلان الكهربائي للهلام الآغاري (AGE) وجهاز تحليل Gel-Pro للحكم على نسبة الالتواء الفائق من خلال صور الرحلان الكهربائي. تظهر إحدى الصور 97.539% من الحمض النووي في الخلايا الجذعية، بينما تظهر صورة أخرى 63.833% من الحمض النووي في الخلايا الجذعية و36.167% من الحمض النووي في الخلايا الجذعية (الحمض النووي الخطي غير مرئي).

سر السموم الداخلية في البلازميدات

إن السموم الداخلية هي أحد مكونات الطبقة الخارجية لجدار خلية البكتيريا سلبية الجرام، والتي يتم إطلاقها بعد موت البكتيريا أو تحللها، وتحتوي على ليبوبوليساكاريد أ السام. أثناء استخلاص البلازميد، تدخل السموم الداخلية إلى محلول التحلل، مما يؤثر على كفاءة النقل ويثير استجابات مناعية غير محددة، مما يؤدي إلى نتائج إيجابية كاذبة في التجارب.

التحليل الكمي والنوعي للسموم الداخلية

يكشف اختبار مستخلص الخلايا الأميبية من ليمولوس (LAL) عن وجود السموم الداخلية من خلال التكتل مع حمض 2-كيتو-3-ديوكسي أوكتونيك (KDO) في الليبوبوليساكاريد (LPS). وهو اختبار نوعي وشبه كمي، حيث يشير إلى وجود السموم الداخلية من خلال التخثر أو تغير اللون عند خلطه بالعينات.

تقدم شركة Yaohai Bio-Pharma بلازميدات فائقة الالتواء خالية من السموم الداخلية. ويعزز الاستعانة بشركة Yaohai كفاءة النقل والتعبير الجيني. تحتوي البلازميدات المقدمة على نسبة ≥95% من الخلايا الجذعية (متوسط ​​85%±10%) ومستويات السموم الداخلية ≤0.1 أو ≤0.01 أو ≤0.005 EU/μg.

كما أننا نبحث بنشاط عن شركاء عالميين مؤسسيين أو فرديين. نحن نقدم التعويض الأكثر تنافسية في هذه الصناعة. إذا كان لديك أي أسئلة، فلا تتردد في الاتصال بنا: [email protected]