Optimizacija procesa čišćenja rekombinantnog ljudskog insulina

U poslednjih godina, rast broja pacijenata sa dijabetesom je poveo zahtev za insulinskom, ali se dostupan i jeftin insulin nalazi u kratkome. Efikasan i ekonomičan proizvodnja insulina je ključna. Glavno se proizvodi preko Escherichia coli (E. coli) i kvasaca zbog brze raste i niske cene, E. coli susreće složenu daljnju obradu.

Pregled daljne obrade:

Čišćenje rekombinantnog ljudskog insulina iz inkluzivnih tela E. coli uključuje više koraka, uključujući oporavak, pranje, solubilizaciju i oksidaciju, šećarenje, zamenu bufera, hromatografsko čišćenje, sraživanje, renaturiranje, enzimatsko šećarenje i formulisanje.

Yaohai Bio-Pharma poseduje obiman iskustvo u proizvodnji i čišćenju rekombinantnog insulina, uz tim stručnjaka, osiguravajući da vaša proizvodnja insulina bude završena sa visokom efikasnošću. Koristeći naše iskustvo iz stotina projekata, Yaohai sažeto objašnjava kako optimizirati proces daljnog čišćenja za rekombinantni ljudski insulin.

Rekovanje i pranje inkluzivnih tela:

Ćelije se razbijaju pomoću mehaničkih metoda (poput ultrazvuka, visokoprskog homogenizatora) ili lizosomenske obrade, a zatim se koriste pralne bufare (koji sadrže ureu, Triton X-100 itd.) da se uklone nečistine. Tijekom pranja, parametri moraju biti optimizirani kako bi se osigurala kvalitetna proteina dok se kontroliraju troškovi.

Rastvaranje inkluzivnih tela i oksidacija:

Koriste se visoke koncentracije denaturanata (poput hidrohidrohidrohidrohidrohidroklorida guanidina i uree) za rastvaranje inkluzivnih tela, uz dodavanje ditiotretolita ili β-merkaptoetanol-a kako bi se sprečilo formiranje pogrešnih disulfidnih veza. pH i temperatura značajno utiču na reakcije rastvaranja i oksidacije.

Otpinjanje i zamjena bufora:

Cianogen bromida se koristi za uklanjanje N-terminalnog početnog aminokiseline, ali stvara probleme odnosno toksičnost i nisku specifičnost. Putem dialize, ultrafiltracije ili hromatografije po veličini, zamena bufera uklanja štetne reagente u pripremi za nadaljne operacije.

Hromatografska čišćenja i sarenjanje:

Korišćenjem više hromatografskih tehnika čišće se insulina, uključujući afinitetnu hromatografiju, jonsku izmenu hromatografije, obrnutofaznu hromatografiju, hidrofobnu interakciju hromatografije i hromatografiju po veličini. Metode sarenjanja, kao što su sarenjanje po pH-u i cinkova kristalizacija, koriste se za uklanjanje nepoželjnih tvari i koncentraciju proteina.

Renaturation:

Rastvorljiv protein se razbija u renaturacionom buferu kako bi se promovisala tačna formiranja disulfidnih veza i foldiranje proteina. Protein-folding tekuća hromatografija i dializa su takođe metode koje se koriste za renaturaciju.

Enzimatsko štapanje i formulisanje:

Tripsin i karboksipeptidaza B se koriste za odsecanje C-peptida, formirajuci aktivni insulin heterodimer. Konačno, kristalizacija i liofilizacija se koriste za uklanjanje ostalih soli i bufera, pripremajući stabilnu formulaciju. Dodaju se specifični aditivi (poput cinka i protamina) da bi se ispunile različite kliničke potrebe.

Zaključak:

Obrađivanje insulinu sa E. coli je složeno. Buduća pažnja treba da bude usmerena na optimizaciju ovih koraka za efikasnu, ekonomsku proizvodnju kako bi se ispuni tražnja i smanjili troškovi.

Yaohai Bio-Pharma takođe aktivan je u pretrazi globalnih partnera, institucija ili pojedinki, i nudi najkonkurentsiju naknadu u industriji. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]