Оптимизација процеса пречишћавања рекомбинантног хуманог инсулина

Последњих година, раст пацијената са дијабетесом подстакао је потражњу за инсулином, али приступачног инсулина недостаје. Ефикасна, економична производња инсулина је кључна. Углавном произведен преко Есцхерицхиа цоли (Е. цоли) и квасца због брзог раста и ниске цене, Е. цоли се суочава са сложеном прерадом у наставку.

Преглед даље обраде:

Пречишћавање рекомбинантног хуманог инсулина из инклузијских тела Е. цоли укључује више корака, укључујући обнављање, испирање, солубилизацију и оксидацију, цепање, размену пуфера, хроматографско пречишћавање, преципитацију, ренатурацију, ензимско цепање и формулацију.

Иаохаи Био-Пхарма се може похвалити великим искуством у производњи и пречишћавању рекомбинантног инсулина, заједно са тимом стручњака, осигуравајући да се ваша производња инсулина заврши са високом ефикасношћу. Користећи наше искуство из стотина пројеката, Иаохаи љубазно сумира како да оптимизује низводни процес пречишћавања за рекомбинантни хумани инсулин.

Инклузија за опоравак и прање тела:

Ћелије се поремете коришћењем механичких метода (као што је ултразвук, хомогенизација под високим притиском) или третманом лизозимом, након чега следи пуфер за прање (који садржи уреу, Тритон Кс-100, итд.) да би се уклониле нечистоће. Током прања, параметри морају бити оптимизовани да би се обезбедио квалитет протеина уз контролу трошкова.

Солубилизација и оксидација инклузивног тела:

Денатуранти високе концентрације (као што су гванидин хидрохлорид и уреа) се користе за солубилизацију инклузионих тела, са додатком дитиотреитола или β-меркаптоетанола да би се спречило стварање нетачних дисулфидних веза. пХ и температура значајно утичу на реакције растворљивости и оксидације.

Цепање и размена бафера:

Цепање цијаноген бромида се користи за уклањање аминокиселине која иницира Н-терминал, али представља токсичност и проблеме са ниском специфичношћу. Кроз дијализу, ултрафилтрацију или хроматографију искључења величине, размена пуфера уклања штетне реагенсе у припреми за наредне операције.

Хроматографско пречишћавање и таложење:

Вишеструке хроматографске технике се користе за пречишћавање инсулина, укључујући афинитетну хроматографију, хроматографију са изменом јона, хроматографију реверзне фазе, хроматографију хидрофобне интеракције и хроматографију искључења величине. Методе преципитације, као што су пХ преципитација и кристализација цинка, користе се за уклањање нечистоћа и концентровање протеина.

ренатурација:

Солубилизовани протеин је разблажен у пуферу за ренатурацију да би се подстакло правилно формирање дисулфидних веза и савијање протеина. Течна хроматографија за савијање протеина и дијализа су такође методе које се користе за ренатурацију.

Ензимско цепање и формулација:

Трипсин и карбоксипептидаза Б се користе за цепање Ц-пептида, формирајући активни хетеродимер инсулина. Коначно, кристализација и лиофилизација се користе за уклањање резидуалних соли и пуфера, припремајући стабилну формулацију. Специфични адитиви (као што су цинк и протамин) се додају да би се задовољиле различите клиничке потребе.

Закључак:

Низводна обрада инсулина од Е. цоли је сложен. Будући фокус би требао бити на оптимизацији ових корака за ефикасну, економичну производњу како би се задовољила потражња и смањили трошкови.

Иаохаи Био-Пхарма такође активно тражи институционалне или појединачне глобалне партнере и нуди најконкурентнију надокнаду у индустрији. Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте: БД@иаохаибио.цн