Оптимизација ћелијског интегритета Е. цоли за производњу Биофарма

У области биофармацеутика, Есцхерицхиа цоли (Е. цоли) игра виталну улогу као домаћин за експресију рекомбинантних протеина. Ћелијски интегритет Е. цоли је кључан за принос протеина, квалитет и трошкове производње. Овај интегритет првенствено укључује структуру и функцију унутрашње мембране (ИМ) и спољашње мембране (ОМ).

Иаохаи Био-Пхарма има 15 година у ферментацији Е. цоли и експресији рекомбинантног протеина. Користимо различите стратегије да задржимо висок ћелијски интегритет Е. цоли, принос плазмида прелази 1г/Л у циклусу култивације од 30 сати. Ослањајући се на велико искуство у експресији микроба, Иаохаи Био-Пхарма је сажела неколико ефикасних стратегија за праћење и побољшање ћелијског интегритета Е. цоли током биофармацеутске производње.

Технике за праћење ћелијског интегритета Е. цоли

Проточна цитометрија: Користи флуоресцентне боје за разликовање ћелијских стања, као што је пропидијум јодид за откривање виталности ћелије и СИТО9 за процену ОМ пермеабилности. Међутим, то захтева високе трошкове мрља и сложених операција.

Колориметријске методе: Одразите лизу ћелије откривањем садржаја ДНК, активности ензима, итд., у супернатанту, као што је коришћење ПицоГреен комплета реагенса и тестова активности алкалне фосфатазе. Ове методе су, међутим, гломазне и захтевају скупе реагенсе.

Течна хроматографија високих перформанси: Користи се за офлајн детекцију екстрацелуларних концентрација производа за процену цурења ОМ. Ипак, његова аутоматизација је сложена и време анализе је дуго.

Технике вибрационе спектроскопије: као што је блиска инфрацрвена и средња инфрацрвена спектроскопија, које имају потенцијалне примене, али захтевају превазилажење спектралних сметњи и изазова анализе података.

Диелектрична спектроскопија: Процењује интегритет мембране мерењем импедансе ћелијских суспензија, омогућавајући онлајн праћење у реалном времену. Међутим, подложан је сметњама и калибрација је тешка.

Биосензори: Могу да открију једињења која су процурила из ћелија или периплазме, али се суочавају са проблемима као што су потешкоће са регенерацијом сензора.

Мерења вискозитета и густине: Ниска цена и брза анализа, али недостаје селективност и захтевају разматрање података из више серија за процену.

Фактори који утичу на интегритет ћелије

Инжењеринг соја: Мења интегритет ОМ путем генетског инжењеринга, као што су мутирајући гени липопротеина, али може утицати на раст соја.

Индуковани стрес: Прекомерна експресија рекомбинантних протеина доводи до метаболичког оптерећења, што утиче на ћелијску физиологију. Стога је неопходна разумна регулација нивоа експресије.

Брзина храњења супстратом: И претерано високе и ниске брзине храњења утичу на лизу ћелија и интегритет ОМ.

Температура и аерација: Високе температуре и ниска доступност кисеоника повећавају стрес експресије и цурење ОМ, респективно, али специфични ефекти варирају.

Осмотици: Користе се за ослобађање периплазматских протеина, али оштећују виталност ћелија, ограничавајући њихову примену.

Закључак Будућа истраживања треба да се дубље удубе у механизме и услове поправке мембране да би се прецизно контролисао интегритет ћелијске мембране. Очекује се да ће оптимизација метода праћења и анализа утицајних фактора побољшати квалитет производа, чиме ће покренути развој биофармацеутске индустрије.

Такође активно тражимо институционалне или појединачне глобалне партнере. Нудимо најконкурентнију накнаду у индустрији. Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте на БД@иаохаибио.цн