כל הקטגוריות
ENEN
אפיון mRNA polyA

אפיון mRNA polyA

עמוד הבית >  אפיון mRNA polyA

אפיון mRNA 3' poly(A).

אפיון mRNA 3' poly(A).

זנב הפולי(A) 3' (פוליאדנוזינים) של mRNA הוא חלק בלתי נפרד מהויסות שלאחר התעתוק, המשפיע על ייצוא, יציבות ותרגום mRNA. במקרה של mRNAs in vitro-transscribed (IVT), זנב ה-poly(A) מוכנס במהלך שעתוק משותף באופן תבניתי או באמצעות תהליך זנב אנזימטי באופן לא תבניתי. פולי(A) זה בגודל 3' משמש כתכונת איכות קריטית (CQA) עבור IVT RNAs, המחייב אפיון יסודי הן במהלך פיתוח התהליך והן במהלך שחרור אצווה.

Yaohai Bio-Pharma מספקת שירותי אפיון 3' פולי(A) מיוחדים, תוך שימוש בטכניקות כגון מחשוף ribonuclease T1 (RNase T1), כרומטוגרפיית נוזלים בביצועים גבוהים עם ביצועים גבוהים (IP-RP-HPLC) / כרומטוגרפיה נוזלית-מסה. (LC-MS), וניתוח נתונים מקיף.

דרישות רגולטוריות לאפיון mRNA 3' poly(A).

על פי השיקולים הרגולטוריים של WHO, "שלמות המבנה של ה-mRNA נחשבת לתכונת איכות קריטית לשחרור ה-mRNA. לפיכך, יש צורך בשליטה על שלמות ה-mRNA, יעילות מכסה של 5', נוכחות או אורך זנב פולי(A) של 3' וכן הלאה."

שיטה אנליטית

אָנָלִיזָה

שיטות

אפיון mRNA 3' poly(A).

LC-MS לאחר עיכול
נוהל
שלב 1. מחשוף RNase T1

ניתוח ישיר של mRNA שלם באורך מלא על ידי LC-MS אינו מעשי בשל הגודל וההטרוגניות שלו. כדי לבחון את זנב הפולי(A), יש לבקע אותו מה-mRNA באורך מלא. השיטה הרווחת כוללת עיכול אנזימטי עם RNase T1, ביקוע סלקטיבי של קצה 3′ של rG תוך שמירה על רצף הפולי(A). דגימת ה-mRNA עוברת עיכול עם RNase T1, ושברי מחשוף המכילים מתיחה של poly(A) מבודדים באמצעות חרוזים מגנטיים מצופים אוליגו dT.

שלב 2. IP-RP-HPLC/LC-MS

הזנבות שחולצו עברו ניתוח באמצעות LC-MS, המציע מידע מדויק על אורך הזנב ברזולוציה של נוקלאוטיד בודד. באנליזה של אוליגונוקלאוטידים LC-MS, הפרדות פאזה הפוכה (IP-RP) בשילוב יונים עם תוספים לפאזה ניידת של אמין עומדות כמצב הכרומטוגרפי המועדף, בשל כוח הפתרון החזק שלהם ותאימותם לספקטרומטריית מסה (MS).

שלב 3. ניתוח נתונים

אורך זנב הפולי(A) והשפע היחסי שלו תלויים במספר ובעוצמת הפסגות חלקי מסה של אדנוזין. לאחר עיבוד או פיתול ספקטרום המסה, ניתן להבחין במסה הצפויה של זנב 100-מר פולי(A) (33,163 Da בקופסה), מלווה בסדרה של מסות מרווחות ב-329 אמו, שווה ערך למסה של אדנוזין (A) .

מקרה של אפיון 3' poly(A) עם LC–MS

Yaohai-BioPharma פיתחה שיטה חזקה לאפיון mRNA 3' poly(A), כולל מחשוף RNase T1 ו-IP-RP-HPLC/LC-MS.

图片 2

Yaohai-BioPharma פיתחה שיטה חזקה לאפיון mRNA 3' poly(A), כולל מחשוף RNase T1 ו-IP-RP-HPLC/LC-MS.

קבל הצעת מחיר חינם

נהיה בקשר