Ανάκληση των Μυστικών της Υψηλής Ποιότητας Εξαγωγής Πλάσμιδων

Η εξαγωγή πλάσμιδων είναι κρίσιμη για τους ερευνητές. Ως γονιδιακοί διαφορετικοί, τα πλάσμιδα είναι αποφασιστικά στην έρευνα εμβολίων και την γονιδιακή θεραπεία, όπου η ποιότητα έχει καίρια σημασία. Κύρια παράγοντες ποιότητας περιλαμβάνουν την αναλογία supercoiled και το περιεχόμενο ενδοτοξίνης. Οι κανονισμοί διαφέρουν: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, με <5% γραμμικό/ανοιχτό κυκλικό DNA. Οι πελάτες συχνά προτιμούν ≥95% supercoiled. Τα επίπεδα ενδοτοξίνης είναι: έρευνα (>50 EU/µg), μεταφορά (<50 EU/µg) και χωρίς ενδοτοξίνες (<0.1 EU/µg).

DNA πλάσμιδων σε μορφή supercoiled

Τα πλάσμιδα από το Escherichia coli περιλαμβάνουν DNA σε μορφή supercoiled (SC), ανοιχτό κυκλικό (OC) και γραμμικό (L). Μεγάλη αναλογία SC βελτιώνει την αποδοτικότητα μεταφοράς και την έκφραση. Για παράδειγμα, η μεταφορά ενός πλάσμιδα με 85.45% SC είναι 2.5 φορές υψηλότερη, και η έκφραση HGF ενός πλάσμιδα με 93.28% SC είναι 1.8 φορές υψηλότερη, επιβεβαιώνοντας την προτεραιότητα του DNA σε μορφή SC.

Ανοιχτό-κυκλικό DNA: Όταν σπάει μια γραμμή του διστικού DNA, η υπερδροστιασμένη δομή γίνεται αργή, μορφώνοντας ένα ανοιχτό-κυκλικό πλάσμιδι με μεγαλύτερο όγκο που μεταφέρεται πιο αργά κατά την ελεκτροφόρηση και βρίσκεται στην κορυφή.

Γραμμικό DNA: Όταν σπάει και οι δύο γραμμές του πλάσμιδι DNA, μορφώνεται μια γραμμική δομή με σχετικά μικρότερο όγκο που μεταφέρεται γρηγορότερα από το ανοιχτό-κυκλικό DNA αλλά πιο αργά από το υπερδροστιασμένο DNA, βρίσκεται στην δεύτερη θέση.

Υπερδροστιασμένο DNA: Δύο ελικοειδείς πλέκτειν, περιστρεφόμενες σε μια υπερδροστιασμένη δομή με βάση την ελικοειδή δομή του DNA. Έχει τον μικρότερο όγκο και μεταφέρεται ταχύτερα κατά την ελεκτροφόρηση, βρίσκεται στον πάτο.

Καταναλωτική Ανάλυση Της Αναλογίας Υπερδροστιασμού

Εργαστήρια χρησιμοποιούν ελεκτροφόρηση σε αγγελιδιαίο αγγείο (AGE) και Gel-Pro Analyzer για να κρίνουν την αναλογία υπερδροστιασμού μέσω εικόνων ελεκτροφόρησης. Μια εικόνα δείχνει 97,539% SC DNA, ενώ μια άλλη δείχνει 63,833% SC και 36,167% OC DNA (γραμμικό DNA μη φανερό).

Το Μυστικό Των Ενδοτοξινών Στα Πλάσμιδια

Το ενδοτοξίνη είναι συστατικό της εξωτερικής στρώσης του κυτταρικού τοιχώματος των βακτηρίων Gram-αρνητικών, που απελευθερώνεται μετά το θάνατο ή τη λύση των βακτηριών, περιέχοντας το δηλητηριώδες λιποπολυσάκχαρο A. Κατά την εξαγωγή πλάσμιδων, το ενδοτοξίνη εισέρχεται στη λυτική λύση, επηρεάζοντας την αποδοτικότητα της μεταφοράς και ενεργοποιώντας μη ειδικές ανοσολογικές αντιδράσεις, που μπορούν να οδηγήσουν σε ψευδείς θετικούς στους πειράματα.

Ποσοτική και Ποιοτική Ανάλυση Ενδοτοξινών

Ο δοκιμαστικός τεστ Limulus amebocyte lysate (LAL) ανιχνεύει το ενδοτοξίνη μέσω συμπάχυνσης με το 2-keto-3-deoxyoctonic acid (KDO) στο λιποπολυσάκχαρο (LPS). Είναι ποιοτικός και μισός ποσοτικός, δείχνοντας την παρουσία ενδοτοξινών μέσω συμπάχυνσης ή αλλαγής χρώματος όταν μεικστεί με δείγματα.

Η Yaohai Bio-Pharma προσφέρει πλάσμιδα υπερβαλλομένων χωρίς ενδοτοξίνες. Η εξωτερικοποίηση στη Yaohai ενισχύει την αποδοτικότητα μεταφοράς και την έκφραση. Τα παραδιδόμενα πλάσμιδα έχουν μια αναλογία ≥95% SC (μέσος όρος 85%±10%) και επίπεδα ενδοτοξινών ≤0.1, ≤0.01, ή ≤0.005 EU/μg.

Επιζητούμε ενεργά παγκόσμιους συνεργάτες, ιδρύματα ή μεμονωμένες οντότητες. Προσφέρουμε την πιο ανταγωνιστική αποζητητική στον τομέα. Εάν έχετε κάποιες ερωτήσεις, μην διστάσετε να μας επικοινωνήσετε: [email protected]