Υποστήριξη Μεθόδων Τροποποίησης Reporter RNA

Όταν επιλέγεται ποιος τρόπος τροποποίησης του mRNA αναφοράς είναι προτιμότερος, δεν υπάρχει κατηγορηματική απάντηση, καθώς κάθε μέθοδος και γονίδιο αναφοράς έχει τις δικές της πλεονεκτήματα και εφαρμοστικές συνεπείες. Εδώ είναι μερικές κοινές μέθοδοι τροποποίησης mRNA και γονιδίων αναφοράς, μαζί με τις παραμετρικές τους ιδιότητες και την επιτροπή.

μέθοδοι Τροποποίησης mRNA

Μεθυλοποίηση:

1. m6A : Συνδεδεμένο με τη σταθερότητα του mRNA, την κοπή, τη μετάφραση και την επεξεργασία miRNA. Οι προκλήσεις ανίχνευσης περιλαμβάνουν την επιλογή αντισώματος και την τοποθέτηση.
2. 5' Cap Nm : Αύξει τη σταθερότητα, την κοπή, την πολυαδενυλοποίηση και την πυρηνική εξαγωγή. Βοηθά να διακρίνεται το self-RNA από το ξένο RNA.
3. Ψευδουριδυλοποίηση : Αλλάζει κωδικούς, ενισχύει τη σταθερότητα και ανταποκρίνεται στον στρες. Καταλύεται από τους συνθετικούς των ψευδο-υριδίνων.

Εισαγωγές Μη Φυσικών Νουκλεοτιδίων:

1. Εισήχθη κατά την μεταγραφή με μια διπλή χημική προσαρμογή. Αυξάνει τη σταθερότητα, την αποδοτικότητα και την έκφραση πρωτεΐνης.

Γονίδια Αναφοράς

1. Γονίδιο Πράσινης Φωτεινής Πρωτεΐνης (GFP) : Προβλέψεις: Εύκολο να ανιχνευθεί, σταθερές ιδιότητες φωτεινότητας, μη δηλητηριώδες για τα κύτταρα, επιτρέπει εικόνες ζωντανών κυττάρων. Μειονεκτήματα: Περιορισμένη ένταση φωτεινότητας.
2. Βελτιωμένη Πράσινη Φωτεινή Πρωτεΐνη (eGFP) : Προβλέψεις: Πάνω από 6 φορές λαμπρότερη από το κανονικό GFP, κάνοντάς την πιο επιτυχημένη ως γονίδιο αναφοράς για τη μελέτη της έκφρασης γονιδίων, ρύθμισης, διάφορησης κυττάρων και τοποθέτησης και μεταφοράς πρωτεΐνων μέσα σε οργανισμούς.
3. Κόκκινες Φωτεινές Πρωτεΐνες (π.χ., mCherry) : Προβλέψεις: Μεγαλύτερες μακρές βαθμολογίες εκκίνησης και εκπομπής, που αποβαίνουν σε χαμηλότερο φόντο κατά την εσωτερική εικόνα, εξαιρετική φωτεινότητα και φωτοσταθερότητα, καθώς και χαμηλότερη δηλητηριότητα για τα κύτταρα. Μειονεκτήματα: Για ορισμένες πειραματικές συνθήκες μπορεί να μην χρησιμοποιείται εξίσου συχνά με το GFP.
4. Φωτοφόρος Φωλιάτη : Πλεονεκτήματα: Στην παρουσία ATP, ιόντων μαγνησίου και οξυγόνου, μπορεί να καταλύσει την οξειδωτική αντιμετώπιση του λουσιφερίνου σε οξυλουσιφερίνο, εκπέμποντας βιολουσκούμινηση. Είναι επιτρεπτό να χρησιμοποιηθεί ως ελέγχος για τη μελέτη της αποδοτικότητας μετάφρασης των στόχων γενών σε μαμμαλιακές κύτταρες, την ζωντανότητα κυττάρων και τις δοκιμές εικονοποίησης in vivo.

Συμπέρασμα

Όταν επιλέγεται ποιος τρόπος τροποποίησης του mRNA του αναφορικού είναι προτιμότερος, εξαρτάται από συγκεκριμένους πειραματικούς στόχους, επιστημονικά φόντα και πειραματικές συνθήκες. Για παράδειγμα, αν απαιτείται υψηλή αισθητικότητα, το eGFP μπορεί να είναι καλύτερη επιλογή. Αν χρειάζεται εικονοποίηση σε μεγαλύτερες μακριάς, για να μειωθεί η ανεπιθύμητη δια摄εισφέρεις, τα κόκκινα φλεγμοντανά πρωτεΐνα όπως το mCherry μπορεί να είναι πιο κατάλληλες. Επιπλέον, βάσει των συγκεκριμένων αναγκών τροποποίησης του mRNA (π.χ., ενίσχυση σταθερότητας, βελτίωση αποδοτικότητας μετάφρασης), μπορεί να επιλεγεί ο αντίστοιχος τρόπος τροποποίησης.

Ως πρώτο και μεγαλύτερο CRDMO μικροβιωλογικών βιοπροϊόντων στη Μεγάλη Κίνα, το Yaohai Bio-Pharma προσφέρει επιχειρήματα λύσεις από άκρη σε άκρη ή απλές υπηρεσίες, που εκτείνονται από τη σύνθεση RNA, τη μεταγενετική μετασχηματισμένη κατασκευή φυλλών, την ανάπτυξη προϊόντων προϋπηρέσεων και μεταπροϊόντων, μέχρι την παραγωγή ουσιών φαρμάκων GMP ή μη-GMP επιπέδου και τις υπηρεσίες γεμισμού και τελικής επεξεργασίας για διάφορες μορφές, όπως mRNA, circRNA, πλάσμα RNA, ανασυνδυασμένα πρωτεΐνες, πεπτίδια, ένζυμα, μονοδομείδια αντισώματα και VLPs για ανθρώπινη και κτηνιατρική χρήση.

Το Yaohai Bio-Pharma αναζητά ενεργά παγκόσμιους εταίρους, θεσμικούς ή ιδιώτες, και προσφέρει την πιο ανταγωνιστική αποδοχή στη βιομηχανία. Εάν έχετε οποιαδήποτε ερώτηση, μην διστάσετε να μας επικοινωνήσετε: [email protected]