Championing Reporter Modification RNA Methods

Όταν επιλέγετε ποια μέθοδος τροποποιήσεων του mRNA αναφοράς είναι προτιμότερη, δεν υπάρχει οριστική απάντηση, καθώς κάθε μέθοδος και γονίδιο αναφοράς έχει τα δικά του πλεονεκτήματα και εφαρμόσιμα σενάρια. Ακολουθούν ορισμένες κοινές μέθοδοι τροποποίησης mRNA και γονίδια αναφοράς, μαζί με τα χαρακτηριστικά και την καταλληλότητά τους.

Μέθοδοι τροποποίησης mRNA

Μεθυλίωση:

1. m6A: Συνδέεται με τη σταθερότητα του mRNA, το μάτισμα, τη μετάφραση και την επεξεργασία του miRNA. Οι προκλήσεις ανίχνευσης περιλαμβάνουν την επιλογή και τον εντοπισμό αντισωμάτων.
2. 5' Καπάκι Nm: Ενισχύει τη σταθερότητα, το μάτισμα, την πολυαδενυλίωση και την πυρηνική εξαγωγή. Βοηθά στη διάκριση του self-RNA από το ξένο RNA.
3. Ψευδοουριδυλίωση: Μεταβάλλει τα κωδικόνια, ενισχύει τη σταθερότητα και ανταποκρίνεται στο στρες. Καταλύεται από συνθάσες ψευδουριδίνης.

Εισαγωγές μη φυσικών νουκλεοτιδίων:

1. Εισήχθη κατά τη μεταγραφή με στρατηγική διπλής χημικής τροποποίησης. Ενισχύει τη σταθερότητα, την αποτελεσματικότητα και την έκφραση πρωτεϊνών.

Reporter Genes

1. Πράσινο φθορίζον γονίδιο πρωτεΐνης (GFP): Πλεονεκτήματα: Εύκολο στην ανίχνευση, σταθερές ιδιότητες φθορισμού, μη τοξικό για τα κύτταρα, κατάλληλο για απεικόνιση ζωντανών κυττάρων. Μειονεκτήματα: Περιορισμένη ένταση φθορισμού.
2. Ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (eGFP): Πλεονεκτήματα: Πάνω από 6 φορές πιο φωτεινό από το GFP άγριου τύπου, καθιστώντας το πιο κατάλληλο ως γονίδιο αναφοράς για τη μελέτη γονιδιακής έκφρασης, ρύθμισης, διαφοροποίησης των κυττάρων και εντοπισμού και μεταφοράς πρωτεϊνών εντός των οργανισμών.
3. Κόκκινες φθορίζουσες πρωτεΐνες (π.χ. mCherry): Πλεονεκτήματα: Μεγαλύτερα μήκη κύματος διέγερσης και εκπομπής, με αποτέλεσμα χαμηλότερο φόντο κατά την ενδοκυτταρική απεικόνιση, εξαιρετική φωτεινότητα φθορισμού και φωτοσταθερότητα και χαμηλότερη κυτταρική τοξικότητα. Μειονεκτήματα: Μπορεί να μην χρησιμοποιείται τόσο συχνά όσο το GFP σε ορισμένες πειραματικές συνθήκες.
4. Firefly Luciferase: Πλεονεκτήματα: Παρουσία ATP, ιόντων μαγνησίου και οξυγόνου, μπορεί να καταλύσει την οξείδωση της λουσιφερίνης σε οξυλουσιφερίνη, εκπέμποντας βιοφωταύγεια. Είναι κατάλληλο για χρήση ως έλεγχος για τη μελέτη της αποτελεσματικότητας μετάφρασης των γονιδίων-στόχων σε κύτταρα θηλαστικών, τη βιωσιμότητα των κυττάρων και τις in vivo δοκιμασίες απεικόνισης.

Συμπέρασμα

Όταν επιλέγετε ποια μέθοδος τροποποιήσεων του mRNA αναφοράς είναι προτιμότερη, εξαρτάται από συγκεκριμένους πειραματικούς στόχους, ερευνητικά υπόβαθρα και πειραματικές συνθήκες. Για παράδειγμα, εάν απαιτείται υψηλή ευαισθησία, το eGFP μπορεί να είναι καλύτερη επιλογή. Εάν απαιτείται απεικόνιση σε μεγαλύτερα μήκη κύματος για τη μείωση της παρεμβολής στο φόντο, οι κόκκινες φθορίζουσες πρωτεΐνες όπως το mCherry μπορεί να είναι πιο κατάλληλες. Επιπλέον, με βάση τις ειδικές ανάγκες τροποποίησης του mRNA (π.χ. ενίσχυση της σταθερότητας, βελτίωση της αποτελεσματικότητας μετάφρασης), μπορεί να επιλεγεί η αντίστοιχη μέθοδος τροποποίησης.

Ως το πρώτο και μεγαλύτερο μικροβιακό βιολογικό CRDMO στην Ευρύτερη Κίνα, η Yaohai Bio-Pharma προσφέρει ολοκληρωμένες λύσεις προσαρμοσμένες σε μία στάση ή αυτόνομες υπηρεσίες που κυμαίνονται από σύνθεση RNA, μηχανική και κατασκευή στελεχών, ανάντη και κατάντη ανάπτυξη διεργασιών έως GMP ή μη -Παραγωγή φαρμακευτικών ουσιών σε επίπεδο GMP και υπηρεσίες πλήρωσης και φινιρίσματος για διάφορους τρόπους, όπως mRNA, circRNA, πλασμίδιο RNA, ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες, πεπτίδια, ένζυμα, αντισώματα μονής περιοχής και VLP για ανθρώπινη και κτηνιατρική χρήση.

Η Yaohai Bio-Pharma αναζητά επίσης ενεργά θεσμικούς ή μεμονωμένους παγκόσμιους εταίρους και προσφέρει την πιο ανταγωνιστική αποζημίωση στον κλάδο. Εάν έχετε οποιεσδήποτε ερωτήσεις, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας: [email protected]