EGFP mRNA-এর উৎপাদন প্রক্রিয়া

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA এর উৎপাদন কর্মপ্রক্রিয়া কার্যকর এক RNA অণু তৈরি করতে এবং eGFP এর ব্যক্তিত্বের জন্য কোড করা হয়। eGFP mRNA এর ক্ষেত্রে, Yaohai Bio-Pharma গ্রাহকদের বিশেষ প্রয়োজনের সাথে সম্পর্ক রাখতে ব্যাপক অভিজ্ঞতা জমা দিয়েছে। আমাদের অভিজ্ঞতা ব্যবহার করে, আমরা EGFP mRNA উৎপাদনের জন্য প্রক্রিয়া ফ্লো সংশ্লেষিত করেছি।

1. EGFP জিন ক্লোনিং : এটি হল eGFP কে কোড করা জিন সিকোয়েন্স পাওয়ার জন্য। এই জিনটি সাধারণত একটি পূর্ব-অস্তিত্ব প্লাজমিড ভেক্টর থেকে ক্লোন করা হয় বা জানা নিউক্লিওটাইড সিকোয়েন্সের উপর ভিত্তি করে কৃত্রিমভাবে সংশ্লেষিত হয়। ক্লোন করা জিনটি তারপর সিকোয়েন্সিং মাধ্যমে যাচাই করা হয় যেন সঠিকতা নিশ্চিত হয়।
2. ব্যক্তিত্বের জন্য জিন অপটিমাইজেশন : লক্ষ্য সিস্টেমে (যেমন, মাম্রি ঘর্ষণীয় কোষ, ব্যাকটেরিয়া, বা in vitro ট্রান্সক্রিপশন সিস্টেম) অপটিমাল এক্সপ্রেশনের জন্য, eGFP জিনের কোডন অপটিমাইজেশন করা হতে পারে। এটি মূল সিকোয়েন্সের দুর্লভ কোডনগুলি হস্ট জীবের বেশি ব্যবহৃত কোডনদিগে প্রতিস্থাপিত করা জড়িত, যা কার্যকরী ট্রান্সলেশনের সম্ভাবনা বাড়ায়।
3. In vitro ট্রান্সক্রিপশন টেমপ্লেট প্রস্তুতি : অপটিমাইজড জিনটি যখন প্রস্তুত হয়, তখন এটি ট্রান্সক্রিপশনের জন্য প্রয়োজনীয় নিয়ন্ত্রক উপাদান (যেমন, প্রোমোটার সিকোয়েন্স) ধারণকারী একটি উপযুক্ত ভেক্টর, সাধারণত একটি প্ল্যাজমিড, এর মধ্যে সংযুক্ত করা হয়। এই প্ল্যাজমিডটি in vitro ট্রান্সক্রিপশনের জন্য একটি টেমপ্লেট হিসেবে কাজ করে।
4. In vitro ট্রান্সক্রিপশন : প্রস্তুত প্লাজমিড টেমপ্লেট ব্যবহার করে, in vitro transcription প্রক্রিয়া দ্বারা eGFP mRNA সংশ্লেষণ করা হয়। এই প্রক্রিয়াতে RNA polymerase এনজাইমের ব্যবহার হয়, যা promoter sequence চিহ্নিত করে এবং transcription শুরু করে, DNA template-এর জন্য একটি complementary RNA strand উৎপাদন করে। আবশ্যক অ্যাপ্লিকেশনের উপর নির্ভর করে, mRNA কে capped, polyadenylated এবং/অথবা modified করা হতে পারে যাতে stability এবং translation efficiency বাড়ে।
5. পরিষ্করণ এবং গুণগত নিয়ন্ত্রণ : সংশ্লেষিত eGFP mRNA তারপর পরিষ্কার করা হয় যেন যেকোনো প্রদূষণ, যামিল DNA, প্রোটিন এবং free nucleotides দূর থাকে। পরিষ্করণের পদ্ধতি গেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস, column chromatography, বা bead-based separation অন্তর্ভুক্ত হতে পারে। পরিষ্করণের পর, mRNA-এর quality বিশ্লেষণ করা হয়, যার মধ্যে concentration, purity এবং integrity অন্তর্ভুক্ত, UV-Vis spectrophotometry এবং gel electrophoresis এর মাধ্যমে।
6. সংরক্ষণ এবং ডেলিভারি : পরিষ্কৃত eGFP mRNA সাধারণত নিম্ন তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয় যেন স্থিতিশীলতা বজায় থাকে। পরীক্ষণের জন্য, mRNA কে বিভিন্ন পদ্ধতি ব্যবহার করে কোষের মধ্যে প্রবেশ করানো যেতে পারে, যার মধ্যে ইলেকট্রোপোরেশন, লিপোফেকশন বা ভাইরাল ভেক্টর অন্তর্ভুক্ত হতে পারে, এটি বিশেষ অ্যাপ্লিকেশন এবং লক্ষ্য কোষের ধরনের উপর নির্ভর করে।
7. অভিব্যক্তি এবং যাচাই : কোষের ভিতরে ঢুকার পর, eGFP mRNA কে বিশেষ সবুজ ফ্লোরেসেন্ট প্রোটিনে অনুবাদ করা হয়, যা ফ্লোরেসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে দেখা যেতে পারে। এটি সফল mRNA উৎপাদন, ডেলিভারি এবং অভিব্যক্তির যাচাই করতে দেয়।

সংক্ষেপে, eGFP mRNA এর উৎপাদন জিনটি ক্লোনিং করা, এটি অভিব্যক্তির জন্য অপটিমাইজ করা, in vitro ট্রান্সক্রিপশন টেমপ্লেট প্রস্তুত করা, ট্রান্সক্রিপশন রিঅ্যাকশন পরিচালনা করা, ফলস্বরূপ মৃদু RNA পরিষ্কার করা এবং শেষ পর্যন্ত এটি কোষের মধ্যে ডেলিভারি করা হয় অভিব্যক্তি এবং যাচাইর জন্য।

আমরা গোটা বিশ্বের প্রতিষ্ঠানিক বা ব্যক্তিগত সহযোগীদেরও খুব উৎসাহিতভাবে খুঁজছি। আমরা শিল্পকায় সবচেয়ে প্রতিদ্বন্দ্বিতামূলক পুরস্কার প্রদান করি। যদি আপনার কোনো প্রশ্ন থাকে, তবে দয়া করে আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন: [email protected]