ইজিএফপি এমআরএনএর উত্পাদন প্রক্রিয়া

ইজিএফপি (এনহ্যান্সড গ্রিন ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন) এমআরএনএ-র উৎপাদনে একটি কার্যকরী আরএনএ অণু তৈরি করতে একাধিক আণবিক জীববিজ্ঞান কৌশল জড়িত থাকে যা ইজিএফপি-এর অভিব্যক্তির জন্য এনকোড করে। eGFP mRNA এর এলাকায়, ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা ক্লায়েন্টদের নির্দিষ্ট চাহিদা পূরণে ব্যাপক অভিজ্ঞতা সঞ্চয় করেছে। আমাদের অভিজ্ঞতাকে কাজে লাগিয়ে, আমরা EGFP mRNA উৎপাদনের জন্য প্রক্রিয়া প্রবাহকে সংশ্লেষিত করেছি।

1. ইজিএফপি জিনের ক্লোনিং: এটি eGFP-এর জন্য জিন সিকোয়েন্স এনকোডিং পেতে। এই জিনটি সাধারণত প্রাক-বিদ্যমান প্লাজমিড ভেক্টর থেকে ক্লোন করা হয় বা পরিচিত নিউক্লিওটাইড সিকোয়েন্সের ভিত্তিতে কৃত্রিমভাবে সংশ্লেষিত হয়। নির্ভুলতা নিশ্চিত করার জন্য ক্লোন করা জিনটি সিকোয়েন্সিংয়ের মাধ্যমে যাচাই করা হয়।
2. অভিব্যক্তির জন্য জিন অপ্টিমাইজেশান: টার্গেট সিস্টেমে (যেমন, স্তন্যপায়ী কোষ, ব্যাকটেরিয়া, বা ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন সিস্টেমে) সর্বোত্তম অভিব্যক্তির জন্য, eGFP জিন কোডন অপ্টিমাইজেশনের মধ্য দিয়ে যেতে পারে। এর মধ্যে মূল ক্রমানুসারে বিরল কোডনগুলিকে হোস্ট অর্গানিজমে আরও ঘন ঘন ব্যবহৃত কোডনগুলির সাথে প্রতিস্থাপন করা জড়িত, দক্ষ অনুবাদের সম্ভাবনা বৃদ্ধি করে৷
3. ইন ভিট্রো ইন প্রতিলিপি টেমপ্লেট প্রস্তুতি: একবার অপ্টিমাইজ করা জিন প্রস্তুত হয়ে গেলে, এটি একটি উপযুক্ত ভেক্টরে অন্তর্ভুক্ত করা হয়, প্রায়শই একটি প্লাজমিড, যাতে ট্রান্সক্রিপশনের জন্য প্রয়োজনীয় নিয়ন্ত্রক উপাদান থাকে (যেমন, একটি প্রবর্তক ক্রম)। এই প্লাজমিড ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশনের টেমপ্লেট হিসেবে কাজ করে।
4. ইন ভিট্রো ইন প্রতিলিপির গ্রহণ: প্রস্তুত প্লাজমিড টেমপ্লেট ব্যবহার করে, ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন ইজিএফপি এমআরএনএ সংশ্লেষিত করার জন্য সঞ্চালিত হয়। এই প্রক্রিয়ায় আরএনএ পলিমারেজ এনজাইম ব্যবহার জড়িত, যা প্রোমোটার সিকোয়েন্স চিনতে পারে এবং ট্রান্সক্রিপশন শুরু করে, ডিএনএ টেমপ্লেটে একটি পরিপূরক আরএনএ স্ট্র্যান্ড তৈরি করে। কাঙ্খিত প্রয়োগের উপর নির্ভর করে, mRNA স্থায়িত্ব এবং অনুবাদ দক্ষতা বাড়াতে ক্যাপড, পলিএডেনিলেটেড এবং/অথবা পরিবর্তিত হতে পারে।
5. পরিশোধন এবং মান নিয়ন্ত্রণ: সংশ্লেষিত eGFP mRNA তারপর ডিএনএ, প্রোটিন এবং বিনামূল্যের নিউক্লিওটাইড সহ যেকোনো দূষক অপসারণের জন্য বিশুদ্ধ করা হয়। পরিশোধন পদ্ধতির মধ্যে জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস, কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি, বা পুঁতি-ভিত্তিক বিচ্ছেদ অন্তর্ভুক্ত থাকতে পারে। বিশুদ্ধকরণের পরে, UV-Vis স্পেকট্রোফোটোমেট্রি এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস-এর মতো কৌশল ব্যবহার করে ঘনত্ব, বিশুদ্ধতা এবং অখণ্ডতা সহ গুণমানের জন্য mRNA বিশ্লেষণ করা হয়।
6. স্টোরেজ এবং ডেলিভারি: পরিশোধিত eGFP mRNA সাধারণত স্থিতিশীলতা বজায় রাখতে কম তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়। পরীক্ষামূলক ব্যবহারের জন্য, নির্দিষ্ট প্রয়োগ এবং লক্ষ্য কোষের প্রকারের উপর নির্ভর করে ইলেক্ট্রোপোরেশন, লাইপোফেকশন বা ভাইরাল ভেক্টর সহ বিভিন্ন পদ্ধতি ব্যবহার করে mRNA কোষে বিতরণ করা যেতে পারে।
7. অভিব্যক্তি এবং যাচাইকরণ: একবার কোষের ভিতরে, eGFP mRNA বর্ধিত সবুজ ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিনে অনুবাদ করা হয়, যা ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে কল্পনা করা যায়। এটি সফল mRNA উত্পাদন, বিতরণ এবং অভিব্যক্তি যাচাই করার অনুমতি দেয়।

সংক্ষেপে, eGFP mRNA-এর উৎপাদনের মধ্যে রয়েছে জিনের ক্লোনিং, অভিব্যক্তির জন্য এটিকে অপ্টিমাইজ করা, একটি ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন টেমপ্লেট প্রস্তুত করা, ট্রান্সক্রিপশন প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করা, ফলস্বরূপ এমআরএনএ শুদ্ধ করা এবং অবশেষে প্রকাশ এবং যাচাইয়ের জন্য কোষে এটি সরবরাহ করা।

আমরা সক্রিয়ভাবে প্রাতিষ্ঠানিক বা ব্যক্তিগত বৈশ্বিক অংশীদার খুঁজছি। আমরা শিল্পে সবচেয়ে প্রতিযোগিতামূলক ক্ষতিপূরণ অফার করি। আপনার যদি কোন প্রশ্ন থাকে, আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন নির্দ্বিধায়: [email protected]