IVT mRNA প্রস্তুতি

ইন ভিট্রো ট্রানসক্রিপশন (IVT) হল এমআরএনএ প্রস্তুতকরণের জন্য প্রধান পদ্ধতি, যা ল্যাব স্কেলে মাইক্রোগ্রাম থেকে মিলিগ্রাম পর্যন্ত এমআরএনএ উৎপাদন করতে সক্ষম। গবেষণার উদ্দেশ্যে, রিজেন্ট সাপ্লাইয়াররা মাঝারি দৈর্ঘ্যের এমআরএনএ (১০০০-৪০০০ নিউক্লিওটাইড) জন্য বহুমুখী IVT রিঅ্যাকশন সিস্টেম উন্নয়ন করেছে।

এই নিবন্ধে, আমরা এমআরএনএর ইন ভিট্রো ট্রানসক্রিপশন (IVT) সারাংশ দিব, যাতে অন্তর্ভুক্ত হবে ল্যাব স্কেলে ব্যবহৃত সাধারণ IVT রিঅ্যাকশন সিস্টেম এবং অতি-দীর্ঘ এমআরএনএ (>৯০০০ নিউক্লিওটাইড) জন্য উপযুক্ত IVT রিঅ্যাকশন সিস্টেম।

কিটগুলি CleanCap AG এর সাথে সহ-ট্রানসক্রিপশনাল ক্যাপিং সম্ভব করে এবং m1ψ এর মাধ্যমে ইমিউনজেনিসিটি কমায়। DNase I অবশিষ্ট ডিএনএ সরিয়ে দেয়। কম উৎপাদন গর্ত ভালভাবে মিশানোর অভাব, রিজেন্ট অক্সিডেশন বা ডিএনএ টেমপ্লেটের সমস্যার কারণে হতে পারে, যা কেন্ট্রিফিউজিং, তাজা রিজেন্ট, নিয়ন্ত্রণ এবং টেমপ্লেটের পরিমাণ/রিঅ্যাকশন সময় সামঞ্জস্য করে কমানো যায়।

যাওহাই বায়ো-ফার্মা বিভিন্ন প্রস্তুতকৃত IVT RNA পণ্য (তরল/শুষ্ক ফ্রিজ-ডাইড পাউডার) এবং LNP সমাপ্ত পণ্য প্রদান করে, যা ফ্লোরেসেন্ট প্রোটিন (eGFP, mCHERRY), লুসিফেরেজ, রিকম্বিনেজ Cre এবং এন্টিজেন OVA এর মতো প্রোটিনগুলি কোডিং করে, যা বিভিন্ন পরীক্ষা বা প্রকল্পের দরকার মেটাতে পারে।

অতি-দীর্ঘ mRNA এর জন্য IVT সিস্টেম

সাধারণ IVT অতি-দীর্ঘ mRNA (>9000 nt) এর জন্য কাজ করতে পারে না। IVT উপাদানগুলির উপর গভীর বোধ এবং যৌক্তিক সংশোধনের প্রয়োজন।

DNA টেমপ্লেট: অনুরূপ প্রোমোটার সিকোয়েন্স সহ লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড বা PCR উৎপাদন, যা RNase-free H2O এ দissolved আছে। অপটিমাল IVT শর্তাবলীর জন্য 40 nM এর চেয়ে বেশি DNA টেমপ্লেট এর একটি আঁকড়ে থাকা প্রস্তাবিত।

DTT: ম্যানস্ক্রিপশনের সময় এনজাইমের ক্রিয়াশীলতা বজায় রাখে। অপটিমাল এনজাইম ক্রিয়াশীলতা জন্য রিয়্যাকশন বাফারে তাজা DTT যোগ করা উচিত।

RNase Inhibitor: RNase এর ক্রিয়াশীলতা হ্রাস করে এবং mRNA এর স্থিতিশীলতা বজায় রাখে।

T7 RNA পলিমারেস: ডিএনএকে আরএনএ-তে পরিণত করে, যা প্রোমোটার সিকোয়েন্সের সাথে মেলে। টি৭ আরএনএ পলিমারেসের কাজ পিএইচ এবং ম্যাগনেশিয়াম আয়নের উপর নির্ভর করে।

ম্যাগনেশিয়াম আয়ন (Mg2+): আরএনএ পলিমারেসের জন্য একটি সহ-অগণিত। অতিরিক্ত কম ঘনত্ব ট্রান্সক্রিপশনের দক্ষতা হ্রাস করে, অন্যদিকে অতিরিক্ত বেশি ঘনত্ব আরএনএ-এর বিঘ্ন ঘটায়। ফ্রি [Mg2+] নিউক্লিওটাইড ঘনত্বের উপর ভিত্তি করে সামঞ্জস্য করা উচিত। প্রতি নিউক্লিওটাইড একটি [Mg2+] বাঁধে, তাই [Mg2+] ঘনত্ব মোট নিউক্লিওটাইড ঘনত্বের চেয়ে বেশি হওয়া উচিত।

নিউক্লিওসাইড ট্রায়াফসফেট (NTP): সাবস্ট্রেট হিসেবে, NTP হল আরএনএ-এর মৌলিক একক। ৭ মিলিমোলার বা তার বেশি NTP ঘনত্ব এমআরএনএ উৎপাদনের উপর ধনাত্মক প্রভাব ফেলে।

স্পারমাইডিন: ডিএনএ-এনজাইম কমপ্লেক্সকে স্থিতিশীল করে এবং ট্রান্সক্রিপশন বিক্রিয়াকে উত্তেজিত করে; তবে অতিরিক্ত ঘনত্ব হল হ্রাসকারী প্রভাব। সুপারমাইডিনের পরামর্শযোগ্য ঘনত্ব ১ থেকে ৩ মিলিমোলার।

ইনোর্গানিক পাইরোফসফেটেস (PPase): আইভি টি রিয়াকশনে যোগ করা হয় যাতে অজৈব পাইরোফসফেট আয়ন (PPi) এর জমা বাড়ানোর প্রতিরোধ করা যায়, Mg2+ এর সাথে তাদের চেলেটেশন এড়ানো যায় এবং যথেষ্ট মুক্ত Mg2+ নিশ্চিত করা যায়।

প্রথমদিকের প্রযুক্তি এবং আইভি টি mRNA অভিজ্ঞতা ব্যবহার করে, যাওহাই বায়ো-ফার্মা এক-স্টপ আইভি টি RNA সার্ভিস প্রদান করে, যা সিকোয়েন্স ডিজাইন, আইভি টি RNA প্রস্তুতি (m1ψ মডস সহ), RNA সাইক্লিজেশন, পুরিফিকেশন, ফ্রিজ-ডাইং, LNP এনক্যাপসুলেশন এবং গুণত্ব পরীক্ষা অন্তর্ভুক্ত করে।

আমরা গোটা বিশ্বের প্রতিষ্ঠানিক বা ব্যক্তিগত সহযোগীদেরও খুব উৎসাহিতভাবে খুঁজছি। আমরা শিল্পকায় সবচেয়ে প্রতিদ্বন্দ্বিতামূলক পুরস্কার প্রদান করি। যদি আপনার কোনো প্রশ্ন থাকে, তবে দয়া করে আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন: [email protected]