IVT mRNA প্রস্তুতি

ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন (IVT) হল mRNA প্রস্তুত করার জন্য পছন্দের পদ্ধতি, যা ল্যাবরেটরি স্কেলে mRNA-এর মিলিগ্রাম থেকে মাইক্রোগ্রাম ফলাতে সক্ষম। গবেষণার উদ্দেশ্যে, বিকারক সরবরাহকারীরা মাঝারি দৈর্ঘ্যের (1000-4000 নিউক্লিওটাইড) mRNA-এর জন্য উপযোগী বহুমুখী IVT প্রতিক্রিয়া সিস্টেম তৈরি করেছে।

এই নিবন্ধে, আমরা mRNA এর ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন (IVT) এর সংক্ষিপ্তসার করব, যার মধ্যে একটি পরীক্ষাগার স্কেলে ব্যবহৃত প্রচলিত IVT প্রতিক্রিয়া সিস্টেম এবং অতি-দীর্ঘ mRNA (>9000 নিউক্লিওটাইড) এর জন্য উপযুক্ত IVT প্রতিক্রিয়া সিস্টেম সহ।

কিটগুলি CleanCap AG-এর সাথে সহ-ট্রান্সক্রিপশনাল ক্যাপিং সক্ষম করে এবং m1ψ দিয়ে ইমিউনোজেনিসিটি কমায়। DNase I অবশিষ্ট ডিএনএ সরিয়ে দেয়। নিম্ন ফলন হতে পারে দুর্বল মিশ্রণ, বিকারক অক্সিডেশন বা ডিএনএ টেমপ্লেট সমস্যার কারণে, যা সেন্ট্রিফিউগেশন, তাজা বিকারক, নিয়ন্ত্রণ এবং সামঞ্জস্য টেমপ্লেট পরিমাণ/প্রতিক্রিয়ার সময় দ্বারা প্রশমিত হতে পারে।

ইয়াওহাই বায়ো-ফার্মা বিভিন্ন প্রিফেব্রিকেটেড IVT RNA পণ্য (তরল/ফ্রিজ-শুকনো পাউডার) এবং LNP তৈরি পণ্য, এনকোডিং প্রোটিন যেমন ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন (eGFP, mCHERRY), luciferase, recombinase Cre, এবং antigen OVA প্রদান করে, বিভিন্ন পরীক্ষামূলক বা প্রকল্প পূরণ করতে। প্রয়োজন

আল্ট্রা-লং mRNA এর জন্য IVT সিস্টেম

প্রচলিত IVT অত্যধিক দীর্ঘ mRNA (>9000 nt) এর জন্য কাজ নাও করতে পারে। IVT উপাদানগুলির একটি গভীর উপলব্ধি এবং যুক্তিসঙ্গত সমন্বয় প্রয়োজন।

ডিএনএ টেমপ্লেট: লিনিয়ারাইজড প্লাজমিড বা পিসিআর পণ্যগুলি সংশ্লিষ্ট প্রমোটার সিকোয়েন্স সহ, RNase-মুক্ত H2O তে দ্রবীভূত হয়। সর্বোত্তম IVT অবস্থার জন্য একটি DNA টেমপ্লেট ঘনত্ব 40 nM-এর চেয়ে বেশি বাঞ্ছনীয়।

ডিটিটি: ট্রান্সক্রিপশনের সময় এনজাইম কার্যকলাপ বজায় রাখে। সর্বোত্তম এনজাইম কার্যকলাপের জন্য প্রতিক্রিয়া বাফারে তাজা DTT যোগ করা উচিত।

RNase ইনহিবিটার: RNase কার্যকলাপকে বাধা দেয় এবং mRNA স্থিতিশীলতা বজায় রাখে।

T7 RNA পলিমারেজ: DNA ট্রান্সক্রিপশনকে RNA-তে অনুঘটক করে, প্রোমোটার সিকোয়েন্সের সাথে মিল রেখে। T7 RNA পলিমারেজের কার্যকলাপ pH এবং ম্যাগনেসিয়াম আয়ন দ্বারা প্রভাবিত হয়।

ম্যাগনেসিয়াম আয়ন (Mg2+): আরএনএ পলিমারেজের জন্য একটি কোফ্যাক্টর। খুব কম ঘনত্ব ট্রান্সক্রিপশন দক্ষতা হ্রাস করে, যখন খুব বেশি ঘনত্ব RNA অবক্ষয়ের দিকে পরিচালিত করে। ফ্রি [Mg2+] নিউক্লিওটাইড ঘনত্বের উপর ভিত্তি করে সামঞ্জস্য করা উচিত। প্রতিটি নিউক্লিওটাইড একটি [Mg2+] চেলেট করে, তাই [Mg2+] ঘনত্ব মোট নিউক্লিওটাইড ঘনত্বের বেশি হওয়া উচিত।

নিউক্লিওসাইড ট্রাইফসফেটস (এনটিপি): সাবস্ট্রেট হিসাবে, NTP হল RNA এর মৌলিক একক। 7 মিমি-এর উপরে NTP ঘনত্ব mRNA উৎপাদনে ইতিবাচক প্রভাব ফেলে।

স্পার্মিডিন: ডিএনএ-এনজাইম কমপ্লেক্সকে স্থিতিশীল করে এবং ট্রান্সক্রিপশন প্রতিক্রিয়া উদ্দীপিত করে; যাইহোক, অত্যধিক ঘনত্ব প্রতিরোধমূলক প্রভাব আছে. প্রস্তাবিত স্পার্মিডিনের ঘনত্ব 1 থেকে 3 মিমি এর মধ্যে।

অজৈব পাইরোফসফেটেস (PPase): অজৈব পাইরোফসফেট আয়ন (পিপিআই) জমা হওয়া রোধ করার জন্য IVT প্রতিক্রিয়াগুলিতে যোগ করা হয়েছে, Mg2+ এর সাথে তাদের চিলেশন এড়ানো এবং পর্যাপ্ত বিনামূল্যে Mg2+ নিশ্চিত করা।

অগ্রগামী প্রযুক্তি এবং IVT mRNA অভিজ্ঞতার ব্যবহার করে, Yaohai Bio-Fharma একটি ওয়ান-স্টপ IVT RNA পরিষেবা প্রদান করে, যার মধ্যে রয়েছে সিকোয়েন্স ডিজাইন, IVT RNA প্রিপ (m1ψ মোড সহ), RNA সাইক্লাইজেশন, পরিশোধন, ফ্রিজ-ড্রাইং, LNP এনক্যাপসুলেশন, এবং গুণমান পরীক্ষা।

আমরা সক্রিয়ভাবে প্রাতিষ্ঠানিক বা ব্যক্তিগত বৈশ্বিক অংশীদার খুঁজছি। আমরা শিল্পে সবচেয়ে প্রতিযোগিতামূলক ক্ষতিপূরণ অফার করি। আপনার যদি কোন প্রশ্ন থাকে, আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন নির্দ্বিধায়: [email protected]