বড় মাত্রার জিন সিনথেসিসের জন্য নতুন ধরনের যৌথ করণ পদ্ধতি

শূন্য থেকে বড় DNA ফ্র্যাগমেন্ট তৈরি করার জন্য এসেম블ি প্রযুক্তি হল জিন সিনথেসিসের মূল ভিত্তি, যা BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC এবং Overlap PCR এর মতো পদ্ধতি অন্তর্ভুক্ত করে। বর্তমান প্রযুক্তির সীমাবদ্ধতার কারণে একক ধাপে জিনের দৈর্ঘ্যের DNA-কে ঠিকভাবে সিনথেসাইজ করা যায় না, তাই খন্ডে খন্ডে সিনথেসাইজ করা হওয়া ওলিগোনিউক্লিওটাইড ফ্র্যাগমেন্টগুলিকে দীর্ঘ DNA ফ্র্যাগমেন্টে পরিণত করতে in vitro এবং in vivo এসেমব্লি পদ্ধতি যুক্ত করা প্রয়োজন।

In vitro এসেমব্লি পদ্ধতি

এগুলি ভ্রিন্ট সাইজ এবং সিকোয়েন্স বৈশিষ্ট্যের উপর নির্ভর করে বিভিন্ন পদ্ধতিতে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়, যার একটি সাধারণ আবশ্যকতা হল টুল এনজাইম ব্যবহার করা। অভারল্যাপ PCR, DNA পলিমেরেস পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে, অপারেশনে সরল এবং দ্রুত। BioBrick এবং BglBrick পদ্ধতি, যা isoschizomers-এর উপর নির্ভর করে, মানকৃত আসেম্বলি সম্ভব করে, যদিও BioBrick পদ্ধতি ফিউশন প্রোটিনের জন্য উপযুক্ত নয়। Golden Gate cloning পদ্ধতি, যা type IIS restriction এনজাইমের উপর ভিত্তি করে, একাধিক ভ্রিন্টের দক্ষ সিলিং অনুমতি দেয়। Gibson assembly পদ্ধতি, যা একাধিক টুল এনজাইমের সংমিশ্রণ ব্যবহার করে, ভ্রিন্ট সাইজ কয়েক শত কিলোবেস পর্যন্ত পৌঁছাতে সক্ষম এবং সিলিং ছাড়াই চলে। DNA ঘটকের মানকৃত ডিজাইন বিদ্যমান ভ্রিন্টের ব্যবহারের হার বাড়ায়।

জীবাণুতে আসেম্বলি পদ্ধতি

যদিও in vitro আসেম্বলি করা ভ্রিন্টের আকার কয়েক শত কিলোবেস পর্যন্ত হতে পারে, তবে উৎপাদন অনেক সময় যথেষ্ট নয়, যা বৃদ্ধির জন্য প্রাণী ব্যবহারের প্রয়োজন হয়, যেমন Escherichia coli. ২০ কিবি এর চেয়ে বড় অংশগুলি যোগ করতে প্রাণীদের ভিতরে পুনর্গঠনকারী সিস্টেম অনেক সময় ব্যবহৃত হয়, যাতে থাকে Bacillus subtilis, ইস্ট এবং ইঞ্জিনিয়ারিং করা ব্যাকটেরিয়া। ইস্ট একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত হোস্ট হিসেবে বছর ধরে এর কার্যক্ষমতা একটি কার্যকর হোমোলজাস রিকম্বিনেশন ক্ষমতা হিসেবে চিহ্নিত হয়েছে। এটি কৃত্রিম ক্রোমোসোম গঠনে ব্যবহৃত হতে পারে যা কয়েক মেগাবেস (Mb) দৈর্ঘ্য পর্যন্ত হতে পারে। এছাড়াও, Saccharomyces cerevisiae ক্রোমোসোমের দৈর্ঘ্যের জন্য অসাধারণ সহনশীলতা প্রদর্শন করে, উচ্চতর প্রাণীদের মধ্যে অত্যন্ত দীর্ঘ ক্রোমোসোম গঠনের জন্য ইস্ট ব্যবহার করার একটি তত্ত্বগত ভিত্তি প্রদান করে।

অ্যাপ্লিকেশন

যাওহাই বায়ো-ফার্মা প্রধানত জিন সিন্থেসিসের জন্য দুটি আসেম্বলি পদ্ধতি ব্যবহার করে: লিগেজ আসেম্বলি এবং ডিএনএ পলিমেরেজ আসেম্বলি। লিগেজ আসেম্বলি পদ্ধতিতে ৫'-ফসফোরিলেটেড অলিগোনিউক্লিওটাইড ফ্র্যাগমেন্টগুলি ডিএনএ লিগেজ ব্যবহার করে ওভারল্যাপিং এবং হাইব্রিডাইজড করে ডাবল-স্ট্র্যান্ড ডিএনএ তৈরি করা হয়। পলিমেরেজ আসেম্বলি পদ্ধতিতে ডিএনএ পলিমেরেজ ব্যবহার করে ওভারল্যাপিং অলিগোনিউক্লিওটাইড ফ্র্যাগমেন্টগুলি এক্সটেন্ড করা হয়, যা ভিন্ন দৈর্ঘ্যের মিশ্রণ তৈরি করে এবং শেষে প্রাইমার ব্যবহার করে সফলভাবে আসেম্বলি করা পূর্ণ দৈর্ঘ্যের ফ্র্যাগমেন্টগুলি বৃদ্ধি করা হয়। যাওহাই ক্লায়েন্টদের জিন সিন্থেসিসের বিশেষ প্রয়োজন পূরণে সাহায্য করতে পারে।

আমরা গোটা বিশ্বের প্রতিষ্ঠানিক বা ব্যক্তিগত সহযোগীদেরও খুব উৎসাহিতভাবে খুঁজছি। আমরা শিল্পকায় সবচেয়ে প্রতিদ্বন্দ্বিতামূলক পুরস্কার প্রদান করি। যদি আপনার কোনো প্রশ্ন থাকে, তবে দয়া করে আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন: [email protected]