Откривање тајни висококвалитетне екстракције плазмида Србија

Екстракција плазмида је кључна за истраживаче. Као вектори гена, плазмиди су витални у истраживању вакцина и генској терапији, где је квалитет битан. Кључни фактори квалитета укључују пропорцију суперцоиллед и садржај ендотоксина. Прописи се разликују: ФДА ≥80%, СМПА ≥85%, НМПА ≥90%, са <5% линеарне/отворено-кружне ДНК. Клијенти често преферирају ≥95% суперцоилед. Нивои ендотоксина су: истраживање (>50 ЕУ/µг), трансфекција (<50 ЕУ/µг) и без ендотоксина (<0.1 ЕУ/µг).

Суперцоилед плазмид ДНК

Плазмиди из Есцхерицхиа цоли укључују супернамотану (СЦ), отворену кружну (ОЦ) и линеарну (Л) ДНК. Висока пропорција СЦ повећава ефикасност трансфекције и експресију. На пример, трансфекција СЦ плазмида од 85.45% је 2.5к већа, а ХГФ експресија СЦ плазмида од 93.28% је 1.8к већа, што потврђује супериорност СЦ ДНК.

Отворена кружна ДНК: Када се један ланац дволанчане ДНК разбије, суперзамотана структура постаје лабава, формирајући отворени кружни плазмид веће запремине који најспорије мигрира током електрофорезе и налази се на врху.

Линеарна ДНК: Када се оба ланца плазмидне ДНК разбију, формира се линеарна структура, са релативно мањим волуменом који мигрира брже од отворене кружне ДНК, али спорије од суперзамотане ДНК, на другом месту.

Супернамотана ДНК: Две спирале се преплићу, увијајући се у супернамотану структуру засновану на спирали ДНК. Има најмањи волумен и најбрже мигрира током електрофорезе, позициониран на дну.

Квантитативна анализа супернамотане пропорције

Лабораторије користе електрофорезу у агарозном гелу (АГЕ) и Гел-Про Анализер да би проценили пропорцију суперсмотаних помоћу слика електрофорезе. Једна слика приказује 97.539% СЦ ДНК, док друга приказује 63.833% СЦ и 36.167% ОЦ ДНК (линеарна ДНК није видљива).

Тајна ендотоксина у плазмидима

Ендотоксин је компонента спољашњег слоја ћелијског зида грам-негативних бактерија, који се ослобађа након бактеријске смрти или лизе, који садржи токсични липополисахарид А. Током екстракције плазмида, ендотоксин улази у раствор за лизу, утиче на ефикасност трансфекције и изазива неспецифичне имуне одговоре, што доводи до на лажне позитивне резултате у експериментима.

Квантитативна и квалитативна анализа ендотоксина

Тест Лимулус амебоцитног лизата (ЛАЛ) открива ендотоксин путем аглутинације са 2-кето-3-деоксиоктонском киселином (КДО) у липополисахариду (ЛПС). Квалитативна је и полуквантитативна, што указује на присуство ендотоксина кроз коагулацију или промену боје када се помеша са узорцима.

Иаохаи Био-Пхарма нуди супернамотане плазмиде без ендотоксина. Оутсоурцинг Иаохаи-у повећава ефикасност трансфекције и изражавања. Испоручени плазмиди имају ≥95% СЦ пропорцију (просечно 85%±10%) и нивое ендотоксина ≤0.1, ≤0.01 или ≤0.005 ЕУ/μг.

Такође активно тражимо институционалне или појединачне глобалне партнере. Нудимо најконкурентнију накнаду у индустрији. Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте: ЦРО@иаохаибио.цн