ИВТ мРНА Припрема

Ин витро транскрипција (ИВТ) је пожељна метода за припрему иРНК, која може дати микрограме до милиграма мРНК у лабораторијској скали. За потребе истраживања, добављачи реагенса развили су разноврсне ИВТ реакционе системе погодне за мРНА умерене дужине (1000-4000 нуклеотида).

У овом чланку ћемо резимирати ин витро транскрипцију (ИВТ) мРНК, укључујући конвенционални ИВТ реакциони систем који се користи у лабораторијској скали и ИВТ реакциони систем погодан за ултра-дугу мРНК (>9000 нуклеотида).

Комплети омогућавају ко-транскрипционо затварање са ЦлеанЦап АГ и смањују имуногеност са м1ψ. ДНаза И уклања заосталу ДНК. Низак принос може бити последица лошег мешања, оксидације реагенса или проблема са ДНК шаблоном, који се могу ублажити центрифугирањем, свежим реагенсима, контролама и подешавањем количине шаблона/времена реакције.

Иаохаи Био-Пхарма обезбеђује различите префабриковане ИВТ РНК производе (течни/лиофилизирани прах) и ЛНП готове производе, који кодирају протеине као што су флуоресцентни протеини (еГФП, мЦХЕРРИ), луцифераза, рекомбиназа Цре и антиген ОВА, како би се задовољили различити експериментални или пројектни потребе.

ИВТ систем за ултра дугу мРНА

Конвенционална ИВТ можда неће радити за предугачку мРНА (>9000 нт). Потребно је дубоко разумевање и рационално прилагођавање компоненти ИВТ.

ДНК шаблон: Линеаризовани плазмиди или ПЦР производи са одговарајућим секвенцама промотера, растворени у Х2О без РНазе. За оптималне услове ИВТ препоручује се концентрација ДНК шаблона већа од 40 нМ.

ДТТ: Одржава активност ензима током транскрипције. Свеж ДТТ треба додати у реакциони пуфер за оптималну активност ензима.

Инхибитор РНазе: Инхибира активност РНКазе и одржава стабилност мРНК.

Т7 РНК полимераза: Катализује транскрипцију ДНК у РНК, што одговара секвенци промотера. На активност Т7 РНК полимеразе утичу пХ и јони магнезијума.

Магнезијум јони (Мг2+): Кофактор за РНК полимеразу. Прениске концентрације смањују ефикасност транскрипције, док превисоке концентрације доводе до разградње РНК. Слободни [Мг2+] треба прилагодити на основу концентрације нуклеотида. Сваки нуклеотид хелатира један [Мг2+], тако да концентрација [Мг2+] треба да буде већа од укупне концентрације нуклеотида.

Нуклеозид трифосфати (НТП): Као супстрати, НТП су основне јединице РНК. Концентрације НТП изнад 7 мМ имају позитиван утицај на производњу мРНК.

спермидин: Стабилизује ДНК-ензимске комплексе и стимулише транскрипционе реакције; међутим, превелике концентрације имају инхибиторне ефекте. Препоручена концентрација спермидина је између 1 и 3 мМ.

Неорганска пирофосфатаза (ППаза): Додаје се ИВТ реакцијама како би се спречило накупљање неорганских пирофосфат јона (ППи), избегавајући њихову хелацију са Мг2+ и обезбеђујући довољно слободног Мг2+.

Користећи пионирску технологију и ИВТ мРНА искуство, Иаохаи Био-Пхарма пружа услугу ИВТ РНК на једном месту, која обухвата дизајн секвенце, ИВТ РНК припрему (са м1ψ модовима), циклизацију РНК, пречишћавање, сушење замрзавањем, ЛНП инкапсулацију и тестирање квалитета.

Такође активно тражимо институционалне или појединачне глобалне партнере. Нудимо најконкурентнију накнаду у индустрији. Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте: ЦРО@иаохаибио.цн