Иновативне технике склапања за синтезу гена великих размера

Технологија склапања за синтезу великих ДНК фрагмената од нуле је камен темељац синтезе гена, обухватајући методе као што су БиоБрицк™, ТАР, БглБрицк, Голден Гате, Гибсонов склоп, ЦПЕЦ и Оверлап ПЦР. Због ограничења тренутне технологије у прецизној синтези ДНК дужине гена у једном кораку, неопходно је комбиновати ин витро и ин виво технике склапања да би се олигонуклеотидни фрагменти синтетизовани у сегментима саставили у дугачке фрагменте ДНК.

Ин витро технике склапања

Они су класификовани у различите методе на основу величине фрагмената и карактеристика секвенце, са заједничким захтевом за коришћење ензима алата. Преклапање ПЦР, засновано на методи ДНК полимеразе, је једноставно и брзо у раду. Методе БиоБрицк и БглБрицк, које се ослањају на изошизомере, омогућавају стандардизовано склапање, иако је БиоБрицк метода неприкладна за фузионе протеине. Метода клонирања Голден Гате-а, заснована на рестрикционим ензимима типа ИИС, омогућава ефикасну бешавну лигацију више фрагмената. Гибсонова метода склапања, која користи комбинацију више ензима алата, омогућава беспрекорну лигацију са величинама фрагмената који достижу неколико стотина кб. Стандардизовани дизајн компоненти ДНК повећава стопу коришћења постојећих фрагмената.

Ин виво технике склапања

Мада ин витро састављени фрагменти могу достићи величину од неколико стотина кб, принос је често недовољан, што захтева амплификацију помоћу организама као што су Есцхерицхиа цоли. У састављању фрагмената који прелазе 20 кб, често се користе рекомбинантни системи унутар организама, укључујући Бациллус субтилис, квасац и пројектоване бактерије. Квасац, као домаћин који се обично користи, већ дуги низ година је познат по својој ефикасној способности хомологне рекомбинације. Може се користити за склапање вештачких хромозома дужине до неколико мегабаза (Мб). Поред тога, Саццхаромицес церевисиае показује изузетну толеранцију на дужину хромозома, пружајући теоријску основу за коришћење квасца за конструисање ултра дугих хромозома у вишим организмима.

aplikacije

Иаохаи Био-Пхарма првенствено користи две методе састављања за синтезу гена: склапање лигазе и склапање ДНК полимеразе. Метода склапања лигазе повезује преклапајуће и хибридизоване 5'-фосфорилисане олигонуклеотидне фрагменте у дволанчану ДНК користећи ДНК лигазу. Метода састављања полимеразе користи ДНК полимеразу за проширење преклапајућих олигонуклеотидних фрагмената кроз хибридизацију, добијање мешавине различитих дужина и коначно амплификацију успешно састављених фрагмената пуне дужине коришћењем прајмера. Иаохаи може помоћи клијентима да задовоље специфичне захтеве у синтези гена.

Такође активно тражимо институционалне или појединачне глобалне партнере. Нудимо најконкурентнију накнаду у индустрији. Ако имате било каквих питања, слободно нас контактирајте: ЦРО@иаохаибио.цн