CircRNA کی تیاری کے لیے لکیری RNA بطور پیشگی مواد (RNA precursor) کی سائکلائزیشن کی ضرورت ہوتی ہے، جہاں RNA precursor کو عام طور پر ایک ٹرانسکرپشن ٹیمپلیٹ کے طور پر linearized plasmid DNA کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا جاتا ہے اور T7 RNA پولیمریز کی مدد سے وٹرو میں نقل کیا جاتا ہے۔
وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) کے لیے اعلیٰ معیار کا پلازمڈ ڈی این اے ضروری ہے۔ بالغ پلازمیڈ تیاری سروس پلیٹ فارم کی بنیاد پر، Yaohai Bio-Pharma IVT مصنوعات کی سالمیت کو یقینی بنانے کے لیے اعلیٰ پاکیزگی اور معیاری لکیری پلاسمڈ DNA (pDNA) کی تیاری کی خدمت فراہم کر سکتا ہے۔
عمل | اختیاری سروس | سروس کی تفصیلات | ترسیل کی مدت (کام کے دن) |
سرکلر پلازمیڈ کی تیاری | جین کی ترکیب | جین کی ترکیب (تیسری پارٹی) | 7-10 |
پلازمیڈ پروردن | پلازمیڈ پروردن | 2 | |
پلازمیڈ نکالنا | |||
لکیری پلاسمڈ کی تیاری | پلازمیڈ لکیریائزیشن اور طہارت | پلازمیڈ لکیریائزیشن | 1 |
لائنرائزیشن ڈی این اے پیوریفیکیشن | |||
پلازمڈ ڈی این اے کوالٹی کنٹرول | ارتکاز کی پاکیزگی | الٹرا وایلیٹ (UV) سپیکٹرو فوٹومیٹری | 1-2 |
پلازمیڈ کی تشکیل | ایگرز جیل الیکٹروفورسس (AGE) | ||
کیپلیری الیکٹروفورسس (سی ای) - اختیاری | |||
پلازمیڈ شناخت | پابندی کے انزائم کی شناخت / AGE |
لکیریائزیشن کے طریقوں کا لچکدار انتخاب
بحالی کی اعلی شرح حاصل کرنے کے لیے ڈی این اے نکالنے اور صاف کرنے کے طریقوں کی اصلاح۔
80% سے زیادہ کی تحقیق کے لیے پلاسمڈ نمونوں کی سپر ہیلیکل کنفارمیشن ریٹ کے ساتھ سخت عمل کے کنٹرول کے معیارات۔
تجرباتی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے اعلیٰ معیاری اور اعلیٰ کارکردگی والے پلازمڈ کی تیاری اور کوالٹی کنٹرول کی خدمات۔
مثال کے طور پر Yaohai Bio-Pharma کے پروڈکٹ mCherry circRNA کو لے کر، ٹرانسکرپشن ٹیمپلیٹ پلاسمڈ نمونے (ریسرچ گریڈ) کا سپر کوائلڈ تناسب 70% سے زیادہ ہے، جس کی لکیریائزیشن کی شرح 100% کے قریب ہے۔
mCherry circRNA ایک ٹیمپلیٹ کے طور پر لکیری پلاسمڈ کے ساتھ تیار کیا جاتا ہے اور 293T خلیوں میں منتقل ہوتا ہے۔ ٹرانسفیکشن کے 24 گھنٹے بعد فلوروسینس ایکسپریشن (ریڈ فلوروسینس) کی اعلی سطح کا پتہ چلتا ہے، جس میں 48 گھنٹے بعد اضافہ کیا جائے گا، اور ٹرانسفیکشن کے بعد 7ویں دن اور 14ویں دن بھی اس کا پتہ لگایا جا سکتا ہے۔
mCherry پروٹین کو مستحکم اور مؤثر طریقے سے ظاہر کیا جاتا ہے، اور ٹرانسکرپشن ٹیمپلیٹ کی پاکیزگی اعلی معیار کے ساتھ circRNA ڈرگ پروڈکٹ (DP) کی ضرورت کو پورا کر سکتی ہے۔
mCherry circRNA کی وٹرو اظہار کی توثیق میں