دو چارجہ انزایمیک حروفانگی کی مقابلے میں، ایک چارجہ مشترکہ نقل کرنے والی حروفانگی کی روش میں عملیاتی پروسیس کو معنوی طور پر کم کیا جا سکتا ہے۔ یہ روش نتیجہ محنت کی ہے اور اس میں آئی وی ٹی (in vitro transcription) واکنش میں حروفانگی کے اضلاع کو شامل کیا جاتا ہے۔ حروفانگی کے اضلاع کو نقل کرنے کے شروعاتی حصے میں داخل کیا جا سکتا ہے، اور نقل کے ختم ہونے پر حروفانگی کی ساخت کے ساتھ mRNA حاصل کیا جا سکتا ہے۔ موجودہ تیسری پیدائش کی حروفانگی عکس حروفانگی کو باطل کر سکتی ہے اور نقل کے پrouct کو Cap 1 ساخت مستقیم طور پر شامل کر سکتی ہے۔
MRNA کی in vivo immunogenicity اور ترجمانی کارآمدی کے لئے، IVT پروسس میں عام طور پر کچھ قسم کے modified NTPs کا استعمال ہوتا ہے، اور مشترکہ modified nucleotides pseudouridine (Ψ)، N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ)، اور 5-methylcytosine (5mC) ہوتے ہیں۔
شکل: mRNA Co-transcriptional اور Capping Reaction کا رجحانیہ نقشہ
سروس |
سروس تفصیلات |
دلواری دوران (کام کرنے والے دن) |
Co-transcriptional capping |
In vitro transcriptional reaction (Clean Cap analog) | 1-2 |
Nucleotide ترمیمیں (Ψ/N1Ψ/5mC) | ||
ڈی این اے ٹیمپلیٹ کو ہٹانا (ڈینیز I) | ||
IVT شرائط کی بہتری - اختیاری |
Reaction components کا ڈیزائن اور بہتری | 3-7 |
عديد اختیاری نوکلیوٹائڈ ترمیم کے استریجیز پروٹین اظہار میں بہتری لائیں سکتے ہیں۔
اچھی طرح کے ٹرانسکرپشن نسبت اور عالی کیپنگ کارکردگی حاصل کریں۔
95 فیصد سے زیادہ کیپنگ شرح حاصل کریں۔
تجرباتی محیط اور استعمالیات میں RNase کی مشدد کنٹرول کے ذریعہ mRNA کی تحلیل سے روکنے کے لئے موثر طریقہ۔
Yaohai Bio-Pharma نے ایک پکا ساتھی ٹرانسکرپشن کیپنگ پروسیس پلیٹ فارم تیار کی ہے، جس میں صاف کیپ انالوگز کے استعمال سے Cap1 ساخت کو مستقیم طور پر شامل کرنے کے لئے معکوس کیپنگ سے بچایا جاتا ہے۔ معیاری نمونے پیش تراشی اور کیپیلری الیکٹروفوریسیس (CE) کا شناسہ کے بعد، میزبان سبز فلوئریسنت پروٹین (eGFP) mRNA کی کیپنگ شرح 95 فیصد سے زیادہ پہنچ جاتی ہے۔
eGFP mRNA کی کیپنگ کارکردگی 95 فیصد سے زیادہ
EGFP mRNA اور mCherry mRNA کو کو-ترانسکرپشنل کیپنگ کے ذریعہ تیار کیا گیا ہے، جو 293T سیلز میں منتقل کیا جاتا ہے، اور 48 گھنٹوں کے بعد مANDOM fluorescent سัญا دیکھائی دیتا ہے، جو یہ بات ظاہر کرتی ہے کہ mRNA کفایت سے 293T سیلز میں عبارت ہوتا ہے۔
293T سیل میں eGFP mRNA اور mCherry mRNA کی عبارت