مرکزی عقیدہ کے مطابق، میسنجر آر این اے (ایم آر این اے) ڈی این اے سے پروٹین تک جینیاتی مواد کی منتقلی کا پل ہے۔
ایم آر این اے ویوو میں پروٹین کو انکوڈنگ کرکے حیاتیاتی کردار ادا کرتا ہے، اور یوکرائیوٹک جانداروں میں بالغ ایم آر این اے پانچ اجزاء پر مشتمل ہوتا ہے: 5' کیپ (کیپ ڈھانچہ)، 5' UTR (نان کوڈنگ علاقہ)، ORF (اوپن ریڈنگ فریم)، 3ʹ UTR ، اور 3' پولی اے ٹیل (پولیڈینیلیٹ ٹیل)۔
عمل | اختیاری سروس | سروس کی تفصیلات | ڈیلیوری کی مدت (دن) |
mRNA ترتیب ڈیزائن اور اصلاح | کوڈنگ کی ترتیب کا ڈیزائن اور اصلاح | سی ڈی ایس کی ترتیب کی سیدھ سی ڈی ایس کوڈن آپٹیمائزیشن | 1 |
نان کوڈنگ کے سلسلے کا ڈیزائن اور اصلاح | 5' UTR ترتیب ڈیزائن اور اصلاح 3' UTR ترتیب ڈیزائن اور اصلاح پولی اے ترتیب ڈیزائن اور اصلاح | 1-2 |
5' UTR/3' UTR |
|
3' پولی اے ٹیل |
|
ایم آر این اے اجزاء | حیاتیاتی افعال | اصلاح کی حکمت عملی |
5' ٹوپی | mRNA کو exonucleases کے ذریعے انحطاط سے بچائیں اور 3' آخر میں پولی اے ٹیل کے ساتھ مل کر کام کریں، پولی اے بائنڈنگ پروٹین اور ٹرانسلیشن انیشیشن فیکٹر پروٹین پروٹین کا ترجمہ شروع کرنے کے لیے۔ | قدرتی Cap1 ڈھانچہ پیٹرن ریکگنیشن ریسیپٹرز سے گریز کرتا ہے اور اس طرح قدرتی مدافعتی ردعمل کو کم کرتا ہے، جو ایک قدمی شریک ٹرانسکرپشن کیپنگ یا دو قدمی انزیمیٹک کیپنگ کے ذریعے حاصل کیا جا سکتا ہے [تفصیلات کے لیے mRNA enzymat ic کیپنگ اور شریک ٹرانسکرپشن کیپنگ دیکھیں]۔ |
5' UTR | 5' UTR کو رائبوزوم کے ذریعے پہچانا جا سکتا ہے، mRNA کے ترجمہ کو منظم کرتا ہے اور mRNA کے استحکام کو متاثر کرتا ہے۔ | انتہائی مستحکم ثانوی ڈھانچے کے بغیر کوزاک کی ترتیب پر مشتمل ہے۔ وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) mRNAs جیسے α-globin اور β-globin کے لیے انتہائی ظاہر شدہ جین کے قدرتی UTRs کو ترجیح دی جاتی ہے۔ |
CDS | پروٹین کوڈنگ والے علاقے اور اینٹیجنز، اینٹی باڈیز، یا دیگر فعال پروٹین کے لیے کوڈنگ کی ترتیب۔ | کوڈن آپٹیمائزیشن ترجمے کی سطح کو بڑھاتی ہے، یہ نوٹ کرتے ہوئے کہ بعض غیر بہترین کوڈنز پروٹین فولڈنگ میں کردار ادا کر سکتے ہیں۔ |
3' UTR | mRNA ترجمہ اور استحکام کو منظم کریں۔ | IVT mRNAs جیسے کہ α-globin اور β-globin کے لیے انتہائی ظاہر شدہ جین کے قدرتی UTRs کو ترجیح دی جاتی ہے۔ |
3' پولی اے ٹیل | پروٹین کے اظہار کو منظم کریں اور ٹوپی کی ساخت کو ڈیگرا ڈیٹیشن سے بچائیں۔ | مناسب لمبائی (100-150 bp) کی ضرورت ہے۔ ٹرانسکرپشن ٹیمپلیٹ پلاسمڈ پر پولی اے ٹیل کو انکوڈنگ کرنا زیادہ وضاحت شدہ پولی اے ٹیل کی لمبائی کو یقینی بناتا ہے۔ |
انتہائی اظہار شدہ قدرتی اور ترمیم شدہ UTR لائبریریوں کے متعدد ذرائع؛ بالغ UTR ترمیم کی حکمت عملی؛
کوڈنز کی اصلاح کو مکمل کرنے کے لیے ایک پیشہ ور AI الگورتھم ٹیم کے ساتھ تعاون کریں۔
ایم آر این اے کی لمبائی کو زیادہ درست طریقے سے کنٹرول کرنے کے لیے ڈی این اے ٹیمپلیٹس کے مطابق پولی اے کی ترتیب شامل کریں۔
کم امیونوجنیسیٹی کے ساتھ mRNA کا موثر اظہار حاصل کریں۔
ڈوئل رپورٹر ایم آر این اے کا ترتیب ڈیزائن: mCherry-eGFP mRNA
Yaohai Bio-Pharma کی mRNA سروس کو ایک ڈبل رپورٹر جین ٹینڈم ترتیب کے ڈیزائن اور اصلاح کے ساتھ اپ گریڈ کیا جانا جاری ہے، جو دوہری جینوں کا مشترکہ اظہار حاصل کرتا ہے۔
روایتی ٹرانسفیکشن ری ایجنٹ کا استعمال کرتے ہوئے، ڈبل جین ٹینڈم سیکوئنس mCherry-eGFP mRNA کو 293T سیلز میں تبدیل کیا جاتا ہے، اور mCherry (سرخ) اور بہتر گرین فلوروسینٹ پروٹین (eGFP) کے دو فلوروسینٹ سگنلز بیک وقت اظہار کے ساتھ دریافت کیے جاتے ہیں اور 48 گھنٹے کے بعد اسٹیک کیا جاتا ہے۔ گراف کو پیلے رنگ میں نمایاں کیا گیا ہے۔
293T سیل میں mCherry-eGFP mRNA کا اظہار