5'-اینڈ کیپنگ mRNA کی ایک ضروری ترمیم ہے۔ کیپ ڈھانچے والے ایم آر این اے، خاص طور پر کیپ 1 ڈھانچے، ایم آر این اے کو ویوو میں فطری مدافعتی ردعمل سے بچنے میں سہولت فراہم کرتے ہیں، جس کے نتیجے میں پروٹین کا موثر ترجمہ ہوتا ہے۔
انزیمیٹک کیپنگ (دو قدمی طریقہ) ایم آر این اے کیپنگ کا روایتی طریقہ ہے، جو یوکرائیوٹک جانداروں میں کیپنگ کے عمل کی طرح ہے۔ انزائمز کی ایک سیریز کے عمل کے تحت، 7-میتھائلگوانائن (m7G) 5'-5' ٹرائی فاسفیٹ بانڈ کے ذریعے mRNA کے 5'-سرے سے منسلک ہوتا ہے اور کیپ ڈھانچہ Cap 1 (m7GpppN) بنانے کے لیے میتھیلیشن ترمیم سے گزرتا ہے۔
قدرتی ٹوپی کی ساخت کی تشکیل کا خاکہ
انزیمیٹک کیپنگ رد عمل کا بہاؤ مندرجہ ذیل ہے:
لائنرائزڈ پلاسمڈ ڈی این اے کو T7 پولیمریز کی موجودگی میں وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) کے سانچے کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے، اور 5' اینڈ کیپ ڈھانچہ والا mRNA ویکسینیا کیپنگ انزائم اور 2'-O کا استعمال کرتے ہوئے ایک قدمی صاف کرنے کے بعد بنتا ہے۔ -میتھل ٹرانسفریز۔
اختیاری سروس | سروس کی تفصیلات | ڈیلیوری کی مدت (دن) |
ایم آر این اے انزیمیٹک کیپنگ | انزیمیٹک کیپنگ ردعمل | 1 |
کیپنگ ردعمل کی اصلاح - اختیاری | رد عمل کے اجزاء کا ڈیزائن اور اصلاح | 3 ~ 7 |
کیپنگ ری ایکشن جزو کو بہتر بنایا گیا ہے، اور mRNA ٹرانسکرپٹ کی پیداوار میں بہت اضافہ ہوا ہے۔
کیپڈ ایم آر این اے کو 293T خلیوں میں تبدیل کیا جاتا ہے، اور ہدف پروٹین کے اظہار کا پتہ لگایا جا سکتا ہے۔
RNaseson تجرباتی ماحول اور استعمال کی اشیاء کے سخت کنٹرول کے ذریعے، mRNA کے انحطاط کو مؤثر طریقے سے روکا جاتا ہے۔
Yaohai Bio-Pharma کے mRNA پلیٹ فارم نے ایک بہترین کیپنگ ری ایکشن پروسیس بنایا ہے۔
eGFP mRNA کے لیے، enzymatic کیپنگ کے ذریعے تیار کردہ ایک mRNA پری پروڈکٹ، اعلی سطح پر ایک eGFP فلوروسینس سگنل (گرین فلوروسینس) کو 293 گھنٹے تک 24T خلیوں کی منتقلی کے بعد دیکھا جا سکتا ہے، جس کا پتہ ویسٹرن بلاٹ (WB) سے ہوتا ہے، یہ ظاہر کرتا ہے۔ ٹارگٹ پروٹین اینہنسڈ گرین فلوروسینٹ پروٹین (ای جی ایف پی) کو وٹرو میں موثر انداز میں ظاہر کیا جا سکتا ہے۔
293T سیل میں انزیمیٹک کیپڈ eGFP mRNA کا اظہار