ایم آر این اے کی بڑے پیمانے پر پیداوار کے حوالے سے، ان وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) ایک زیادہ موثر اور پختہ طریقہ ہے۔ IVT کا رد عمل لکیری پلاسمڈ DNA کو اپناتا ہے جس میں T7 پروموٹر ہوتا ہے، اور mRNA کو T7 RNA پولیمریز کی موجودگی میں سبسٹریٹس کے طور پر نیوکلیوسائیڈ ٹرائی فاسفیٹس (NTPs) کے ساتھ ترکیب کیا جاتا ہے۔
نیوکلیوٹائڈ ترمیم ایم آر این اے کی تلاش میں ایک پیش رفت ہے، جہاں غیر ترمیم شدہ ایم آر این اے مالیکیولز کو انٹرا سیلولر آر این اے سینسر کے ذریعے پہچانا جاتا ہے تاکہ پیدائشی قوت مدافعت کو فعال کیا جا سکے۔ ویوو امیونوجنیسیٹی اور ترجمے کی کارکردگی میں mRNA پر غور کرنے کے لیے، IVT عمل عام طور پر کچھ قسم کے ترمیم شدہ NTPs کو استعمال کرتا ہے، اور عام ترمیم شدہ نیوکلیوٹائڈز ہیں pseudouridine (Ψ)، N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ)، اور 5-methylcytosine (5mC)۔
ان وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) رد عمل کا خاکہ
اختیاری سروس | سروس کی تفصیلات | ترسیل کی مدت (کام کے دن) |
ان وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) | IVT، ان وٹرو ٹرانسکرپشن | 1 |
نیوکلیوٹائڈ ترمیم (Ψ/N1Ψ/5mC، وغیرہ) | ||
ڈی این اے ٹیمپلیٹ کو ہٹانا (DNase I) | ||
IVT حالت کی اصلاح - اختیاری | IVT ردعمل کے اجزاء ڈیزائن اور اصلاح | 2-5 |
vivo میں mRNA استحکام اور پروٹین کے اظہار کو بہتر بنائیں۔
mRNA ٹکڑے کی تیاری 10kb تک حاصل کی جا سکتی ہے۔
IVT ردعمل کے حالات کو بہتر بنا کر، نقل کی شرح 1:200 تک ہے۔
تجرباتی ماحول اور استعمال کی اشیاء کے ذریعے RNase کا سخت کنٹرول mRNA کے انحطاط کو مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔
موجودہ IVT ردعمل کا نظام تقریباً 100 nt کی لمبائی والے مصنوعی نظاموں کے لیے موزوں ہے، نہ کہ من مانی لمبائی کے mRNAs کے لیے۔ ایم آر این اے کی ترتیب جتنی لمبی ہوگی، نقل کرنا اتنا ہی مشکل ہوگا اور انحطاط کا اتنا ہی زیادہ خطرہ ہوگا۔
تقریباً 10 kb کی لمبائی کے ساتھ حسب ضرورت mRNA ترتیب تیار کرنے کے لیے، Yaohai Bio-Pharma نے 1:135 کے اعلی ٹرانسکرپشن تناسب کے ساتھ کامیابی کے ساتھ اعلیٰ معیار کے نمونے تیار کیے ہیں اور 135 μg لائنرائزڈ پلاسمڈ کے بعد 1 μg ابتدائی طور پر پیوریفائیڈ mRNA مصنوعات حاصل کی ہیں۔ سخت تجرباتی ڈیزائن، رد عمل کے حالات کی مسلسل اصلاح، اور RNase کے سخت کنٹرول کے ذریعے وٹرو میں نقل کیا گیا تھا۔
ایم آر این اے کی شناخت (ایگروز جیل الیکٹروفورسس)