EGFP mRNA کی تیاری کا عمل

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA کی تولید مولیکلر بائیولojی کے سلسلہ کاروائیوں پر مشتمل ہے جس کے ذریعے ایک فنکشنل RNA مolecule حاصل کیا جاتا ہے جو eGFP کی عبارت کے لئے کوڈ کرتا ہے۔ eGFP mRNA کے شعبے میں Yaohai Bio-Pharma نے مشتریوں کی خاص ضروریات کو پورا کرنے کے لئے وسیع تجربہ جمع کیا ہے۔ اپنے تجربے کو استعمال کرتے ہوئے، ہم EGFP mRNA تولید کے لئے پروسیس فلو کو سمیٹ دیا ہے۔

1. EGFP گین کو کلوننگ : اس کے لئے eGFP کو کوڈ کرنے والی گین سیکوئنس حاصل کی جاتی ہے۔ یہ گین عام طور پر پہلے سے موجود plasmid vector سے کلون کی جاتی ہے یا معروف nucleotide سیکوئنس پر مبنی طور پر مصنوعی طور پر سنتھیز کی جاتی ہے۔ کلون کردہ گین کو sequencing کے ذریعے تصدیق کیا جاتا ہے تاکہ درستگی یقینی بنائی جاسکے۔
2. عبارت کے لئے گین کو آپٹیマイز کرنا : لکھنے والے نظام میں بہترین طریقے سے اظہار کے لئے (مثلاً، جانوری خلیات، باکٹیریا یا in vitro لکھنے کے نظام)، eGFP ژن کوڈن کی ترجیح کے ذریعے مناسب بنایا جاسکتا ہے۔ یہ اصل ترتیب میں نادر کوڈن کو مستقبلی آرگنزم میں زیادہ استعمال ہونے والے کوڈن کے ساتھ بدل دینا شامل ہے، موثر ترجمہ کے موقع کو بڑھانا ہے۔
3. لابرٹری میں لکھنے کے قالب کی تیاری : جب مناسب بنایا گیا ژن تیار ہوتا ہے تو اسے ایک مناسب ویکٹر میں شامل کردیا جاتا ہے، اکثراً ایک پلاسمڈ، جو لکھنے کے لئے ضروری تنظیمی عناصر (مثلاً، ایک پروموٹر تسلسل) کے ساتھ ہوتا ہے۔ اس پلاسمڈ in vitro لکھنے کے لئے قالب کے طور پر خدمات انجام دیتا ہے۔
4. لابرٹری میں لکھنے : تیار شدہ پلاسمڈ ٹیمپلیٹ کے استعمال سے، ان وائٹرو ٹرانسکرپشن کو انجام دیا جاتا ہے تاکہ eGFP mRNA کا سنٹھنا ہو۔ یہ فرآیند RNA پالیمریز آنزائمس کے استعمال پر مشتمل ہوتا ہے، جو پروموٹر سیکوئنس کو تشخیص دیتے ہیں اور ٹرانسکرپشن کو شروع کرتے ہیں، DNA ٹیمپلیٹ کے لیے مطابق RNA سترینڈ پیدا کرتے ہیں۔ مراد کردہ اطلاق کے برعکس، mRNA کو کیپ کیا جا سکتا ہے، پولی ایڈنیلیٹ کیا جا سکتا ہے، اور/یا استحکام اور ترجمانی کی کارکردگی میں بہتری کے لیے تبدیل کیا جا سکتا ہے۔
5. پرچاس اور کوالٹی کنٹرول : تیار شدہ eGFP mRNA کو آلودگیوں سے نکالنے کے لیے صاف کیا جاتا ہے، جن میں DNA، پروٹینز اور آزاد نیوکلیوٹائیڈز شامل ہیں۔ صاف کرنے کے طریقوں میں گیل الیکٹروفوریسیس، کالم کرویمیٹوگرافی یا بیڈ بنیادی الگ کرنے کی ضرورت ہوسکتی ہے۔ صاف کرنے کے بعد، mRNA کو کوالٹی کے لیے تجزیہ کیا جاتا ہے، جس میں کانسینٹریشن، صفائی اور Integrity شامل ہیں، جو UV-Vis سپیکٹروفورمیٹری اور گیل الیکٹروفوریسیس جیسے طریقوں کے ذریعہ کیا جاتا ہے۔
6. ذخیرہ کرنا اور ڈلیوری : پاک کردہ eGFP mRNA عام طور پر کم درجہ حرارت پر محفوظ کیا جاتا ہے تاکہ ثبات برقرار رہے۔ تجربتی استعمال کے لئے، mRNA کو انتخابی طریقہ جات، جنमں دونےlectroporation، lipofection، یا وائرل vectors کے ذریعے سل کے اندر دلایا جاسکتا ہے، خاص استعمال اور نشانہ سل کی قسم پر منحصر ہے۔
7. برقراری اور تصدیق : جب سل کے اندر داخل ہوجاتا ہے تو eGFP mRNA کو enhanced green fluorescent protein میں ترجمہ کیا جاتا ہے، جسے fluorescence microscopy کے ذریعے دیکھا جاسکتا ہے۔ یہ mRNA پیداوار، دلائی اور برقراری کی کامیابی کی تصدیق کرنے کے لئے مدد کرتا ہے۔

خلاصہ میں، eGFP mRNA کی پیداوار میں گین کلوننگ، اس کے لئے بہترین بنیادیں، in vitro transcription template کی تیاری، transcription reaction کا عمل، حاصلہ mRNA کی پاک کردگی، اور آخر کار سل کے لئے دلائی اور برقراری کے لئے تسلیم کیا جاتا ہے۔

ہم عالمی شرکاء یا انفرادی شرکاء تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ رقابتی Compensations پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کو کوئی سوال ہے تو ہمارے ساتھ تماس کریں: [email protected]