ای جی ایف پی ایم آر این اے کی تیاری کا عمل

eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA کی تیاری میں ایک فنکشنل RNA مالیکیول تیار کرنے کے لیے مالیکیولر بائیولوجی تکنیکوں کا ایک سلسلہ شامل ہے جو eGFP کے اظہار کے لیے انکوڈ کرتا ہے۔ eGFP mRNA کے علاقے میں، Yaohai Bio-Pharma نے گاہکوں کی مخصوص ضروریات کو پورا کرنے میں وسیع تجربہ حاصل کیا ہے۔ اپنے تجربے سے فائدہ اٹھاتے ہوئے، ہم نے EGFP mRNA تیار کرنے کے لیے عمل کے بہاؤ کی ترکیب کی ہے۔

1. ای جی ایف پی جین کی کلوننگ: یہ ای جی ایف پی کے لیے جین کی ترتیب کی انکوڈنگ حاصل کرنے کے لیے ہے۔ یہ جین عام طور پر پہلے سے موجود پلازمڈ ویکٹر سے کلون کیا جاتا ہے یا معلوم نیوکلیوٹائڈ ترتیب کی بنیاد پر مصنوعی طور پر ترکیب کیا جاتا ہے۔ اس کے بعد کلون شدہ جین کی درستگی کو یقینی بنانے کے لیے ترتیب کے ذریعے تصدیق کی جاتی ہے۔
2. اظہار کے لیے جین کی اصلاح: ہدف کے نظام میں زیادہ سے زیادہ اظہار کے لیے (مثلاً ممالیہ کے خلیے، بیکٹیریا، یا وٹرو ٹرانسکرپشن سسٹم میں)، ای جی ایف پی جین کوڈن کی اصلاح سے گزر سکتا ہے۔ اس میں اصل ترتیب میں نایاب کوڈنز کو میزبان حیاتیات میں زیادہ کثرت سے استعمال ہونے والے کوڈنز سے بدلنا شامل ہے، جس سے موثر ترجمہ کے امکانات بڑھ جاتے ہیں۔
3. وٹرو میں ٹرانسکرپشن ٹیمپلیٹ کی تیاری: ایک بار جب آپٹمائزڈ جین تیار ہو جاتا ہے، تو اسے ایک مناسب ویکٹر میں شامل کیا جاتا ہے، اکثر ایک پلاسمڈ، جس میں نقل کے لیے ضروری ریگولیٹری عناصر ہوتے ہیں (مثلاً، پروموٹر کی ترتیب)۔ یہ پلاسمڈ ان وٹرو ٹرانسکرپشن کے لیے ایک ٹیمپلیٹ کے طور پر کام کرتا ہے۔
4. وٹرو میں مائلیکھن: تیار شدہ پلاسمڈ ٹیمپلیٹ کا استعمال کرتے ہوئے، وٹرو ٹرانسکرپشن کو eGFP mRNA کی ترکیب کے لیے انجام دیا جاتا ہے۔ اس عمل میں آر این اے پولیمریز انزائمز کا استعمال شامل ہے، جو پروموٹر کی ترتیب کو پہچانتے ہیں اور ٹرانسکرپشن کو شروع کرتے ہیں، جس سے ڈی این اے ٹیمپلیٹ میں ایک تکمیلی آر این اے اسٹرینڈ تیار ہوتا ہے۔ مطلوبہ ایپلی کیشن پر منحصر ہے، mRNA کو کیپ کیا جا سکتا ہے، پولی ڈینیلیٹ کیا جا سکتا ہے، اور/یا استحکام اور ترجمے کی کارکردگی کو بڑھانے کے لیے اس میں ترمیم کی جا سکتی ہے۔
5. طہارت اور کوالٹی کنٹرول: ترکیب شدہ eGFP mRNA پھر کسی بھی آلودگی کو دور کرنے کے لیے پاک کیا جاتا ہے، بشمول DNA، پروٹین، اور مفت نیوکلیوٹائڈس۔ طہارت کے طریقوں میں جیل الیکٹروفورسس، کالم کرومیٹوگرافی، یا مالا کی بنیاد پر علیحدگی شامل ہوسکتی ہے۔ طہارت کے بعد، mRNA کا تجزیہ معیار کے لیے کیا جاتا ہے، بشمول ارتکاز، پاکیزگی، اور سالمیت، UV-Vis spectrophotometry اور جیل الیکٹروفورسس جیسی تکنیکوں کا استعمال کرتے ہوئے۔
6. ذخیرہ اور ترسیل: پیوریفائیڈ ای جی ایف پی ایم آر این اے کو استحکام برقرار رکھنے کے لیے عام طور پر کم درجہ حرارت پر ذخیرہ کیا جاتا ہے۔ تجرباتی استعمال کے لیے، mRNA کو مختلف طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں میں پہنچایا جا سکتا ہے، بشمول الیکٹروپوریشن، لائپوفیکشن، یا وائرل ویکٹر، مخصوص ایپلی کیشن اور ہدف سیل کی قسم پر منحصر ہے۔
7. اظہار اور تصدیق: سیل کے اندر آنے کے بعد، eGFP mRNA کو بہتر سبز فلوروسینٹ پروٹین میں ترجمہ کیا جاتا ہے، جسے فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے تصور کیا جا سکتا ہے۔ یہ کامیاب mRNA کی پیداوار، ترسیل، اور اظہار کی تصدیق کی اجازت دیتا ہے۔

خلاصہ یہ کہ ای جی ایف پی ایم آر این اے کی تیاری میں جین کی کلوننگ، اظہار کے لیے اسے بہتر بنانا، ان وٹرو ٹرانسکرپشن ٹیمپلیٹ تیار کرنا، ٹرانسکرپشن ری ایکشن انجام دینا، نتیجے میں آنے والے ایم آر این اے کو صاف کرنا، اور آخر میں اظہار اور تصدیق کے لیے اسے خلیوں میں پہنچانا شامل ہے۔

ہم ادارہ جاتی یا انفرادی عالمی شراکت داروں کی بھی سرگرمی سے تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ مسابقتی معاوضہ پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کے کوئی سوالات ہیں، تو براہ مہربانی بلا جھجھک ہم سے رابطہ کریں: [email protected]