اعلی معیار کے پلازمیڈ نکالنے کے راز کو کھولنا

پلاسمڈ نکالنا محققین کے لیے اہم ہے۔ جین ویکٹر کے طور پر، پلازمیڈ ویکسین کی تحقیق اور جین تھراپی میں اہم ہیں، جہاں معیار اہمیت رکھتا ہے۔ کلیدی معیار کے عوامل میں سپر کوائلڈ تناسب اور اینڈوٹوکسین مواد شامل ہیں۔ ضابطے مختلف ہوتے ہیں: FDA ≥80%، SMPA ≥85%، NMPA ≥90%، <5% لکیری/اوپن سرکلر DNA کے ساتھ۔ کلائنٹ اکثر ≥95% سپر کوائلڈ کو ترجیح دیتے ہیں۔ اینڈوٹوکسین کی سطحیں ہیں: تحقیق (>50 EU/µg)، ٹرانسفیکشن (<50 EU/µg)، اور اینڈوٹوکسین فری (<0.1 EU/µg)۔

سپر کوائلڈ پلازمیڈ ڈی این اے

Escherichia coli کے پلازمیڈ میں سپر کوائلڈ (SC)، اوپن سرکلر (OC) اور لکیری (L) DNA شامل ہیں۔ اعلی SC تناسب منتقلی کی کارکردگی اور اظہار کو بڑھاتا ہے۔ مثال کے طور پر، ایک 85.45% SC پلاسمڈ کی منتقلی 2.5x زیادہ ہے، اور 93.28% SC پلاسمڈ کا HGF اظہار 1.8x زیادہ ہے، جو SC DNA کی برتری کی تصدیق کرتا ہے۔

اوپن سرکلر ڈی این اے: جب دوہری پھنسے ہوئے ڈی این اے کا ایک اسٹرینڈ ٹوٹ جاتا ہے، تو سپر کوائلڈ ڈھانچہ ڈھیلا ہو جاتا ہے، جس سے بڑے حجم کے ساتھ ایک کھلا سرکلر پلاسمڈ بنتا ہے جو الیکٹروفورسس کے دوران سب سے آہستہ منتقل ہوتا ہے اور سب سے اوپر ہوتا ہے۔

لکیری ڈی این اے: جب پلاسمڈ ڈی این اے کے دونوں پٹے ٹوٹ جاتے ہیں تو ایک لکیری ڈھانچہ بنتا ہے، جس کا حجم نسبتاً کم ہوتا ہے جو کھلے دائرے والے ڈی این اے سے زیادہ تیزی سے منتقل ہوتا ہے لیکن سپر کوائلڈ ڈی این اے سے آہستہ، دوسرے نمبر پر ہوتا ہے۔

سپر کوائلڈ ڈی این اے: دو ہیلکس آپس میں جڑے ہوئے ہیں، ڈی این اے ہیلکس کی بنیاد پر ایک سپر کوائلڈ ڈھانچے میں گھماتے ہیں۔ اس کا حجم سب سے چھوٹا ہے اور الیکٹروفورسس کے دوران سب سے تیزی سے ہجرت کرتا ہے، جو نچلے حصے میں ہوتا ہے۔

سپر کوائلڈ تناسب کا مقداری تجزیہ

لیبز ایگرز جیل الیکٹروفورسس (AGE) اور جیل-پرو تجزیہ کار کا استعمال الیکٹروفورسس امیجز کے ذریعے سپر کوائلڈ تناسب کو جانچنے کے لیے کرتی ہیں۔ ایک تصویر 97.539% SC DNA دکھاتی ہے، جبکہ دوسری میں 63.833% SC اور 36.167% OC DNA (لکیری DNA نظر نہیں آتا) دکھاتا ہے۔

پلازمیڈ میں اینڈوٹوکسین کا راز

Endotoxin گرام منفی بیکٹیریا کی خلیے کی دیوار کی بیرونی تہہ کا ایک جز ہے، جو بیکٹیریا کی موت یا lysis کے بعد جاری ہوتا ہے، جس میں زہریلا lipopolysaccharide A ہوتا ہے۔ پلاسمڈ نکالنے کے دوران، endotoxin lysis کے محلول میں داخل ہوتا ہے، منتقلی کی کارکردگی کو متاثر کرتا ہے اور غیر مخصوص مدافعتی ردعمل کو متحرک کرتا ہے۔ تجربات میں جھوٹے مثبت کو۔

اینڈوٹوکسین کا مقداری اور کوالٹیٹو تجزیہ

Limulus amebocyte lysate (LAL) ٹیسٹ lipopolysaccharide (LPS) میں 2-keto-3-deoxyoctonic acid (KDO) کے ساتھ جمع کے ذریعے اینڈوٹوکسین کا پتہ لگاتا ہے۔ یہ گتاتمک اور نیم مقداری ہے، جو نمونوں کے ساتھ ملا کر جمنے یا رنگ کی تبدیلی کے ذریعے اینڈوٹوکسین کی موجودگی کی نشاندہی کرتا ہے۔

یاوہائی بائیو فارما اینڈوٹوکسین سے پاک سپر کوائلڈ پلازمیڈ پیش کرتا ہے۔ Yaohai کو آؤٹ سورس کرنے سے ٹرانسفیکشن اور اظہار کی کارکردگی میں اضافہ ہوتا ہے۔ ڈیلیور کردہ پلازمیڈز میں ≥95% SC تناسب (اوسط 85%±10%) اور اینڈوٹوکسین کی سطح ≤0.1، ≤0.01، یا ≤0.005 EU/μg ہوتی ہے۔

ہم ادارہ جاتی یا انفرادی عالمی شراکت داروں کی بھی سرگرمی سے تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ مسابقتی معاوضہ پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کے کوئی سوالات ہیں، تو براہ مہربانی بلا جھجھک ہم سے رابطہ کریں: [email protected]