Recombinant انسانی انسولین کے لیے طہارت کے عمل کو بہتر بنانا

حالیہ برسوں میں، ذیابیطس کے مریضوں کی نشوونما نے انسولین کی طلب میں اضافہ کیا ہے، لیکن سستی انسولین کی فراہمی کم ہے۔ موثر، اقتصادی انسولین کی پیداوار اہم ہے. تیز رفتار ترقی اور کم لاگت کی وجہ سے بنیادی طور پر E. coli (E. coli) اور خمیر کے ذریعے تیار کیا جاتا ہے، E. coli کو پیچیدہ بہاو پروسیسنگ کا سامنا ہے۔

ڈاؤن اسٹریم پروسیسنگ کا جائزہ:

ای کولی انکلوژن باڈیز سے دوبارہ پیدا ہونے والے انسانی انسولین کو صاف کرنے میں متعدد مراحل شامل ہیں، بشمول بحالی، دھونے، حل کرنے اور آکسیڈیشن، کلیویج، بفر ایکسچینج، کرومیٹوگرافک پیوریفیکیشن، ورن، رینیچریشن، انزیمیٹک کلیویج، اور فارمولیشن۔

Yaohai Bio-Farma ماہرین کی ایک ٹیم کے ساتھ مل کر دوبارہ پیدا ہونے والے انسولین کی پیداوار اور پیوریفیکیشن میں وسیع تجربے کا حامل ہے، اس بات کو یقینی بناتا ہے کہ آپ کی انسولین کی پیداوار اعلی کارکردگی کے ساتھ مکمل ہو۔ سینکڑوں منصوبوں سے اپنے تجربے سے فائدہ اٹھاتے ہوئے، Yaohai مہربانی سے خلاصہ کرتا ہے کہ کس طرح Recombinant Human Insulin کے لیے Downstream Purification Process کو بہتر بنایا جائے۔

انکلوژن باڈی ریکوری اور واشنگ:

خلیات کو مکینیکل طریقوں (جیسے الٹراسونیکیشن، ہائی پریشر ہوموجنائزیشن) یا لائزوزائم ٹریٹمنٹ کا استعمال کرتے ہوئے خلل ڈالا جاتا ہے، اس کے بعد نجاست کو دور کرنے کے لیے بفرز (جس میں یوریا، ٹریٹن X-100 وغیرہ) کو دھویا جاتا ہے۔ دھونے کے دوران، قیمتوں کو کنٹرول کرتے ہوئے پروٹین کے معیار کو یقینی بنانے کے لیے پیرامیٹرز کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔

شمولیت جسمانی حل اور آکسیکرن:

زیادہ ارتکاز والے ڈینیچرنٹس (جیسے گوانیڈائن ہائیڈروکلورائیڈ اور یوریا) کو انکلوژن باڈیز کو حل کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، جس میں dithiothreitol یا β-mercaptoethanol شامل کیا جاتا ہے تاکہ غلط ڈسلفائیڈ بانڈز کی تشکیل کو روکا جا سکے۔ پی ایچ اور درجہ حرارت گھلنشیل اور آکسیکرن کے رد عمل کو نمایاں طور پر متاثر کرتے ہیں۔

کلیویج اور بفر ایکسچینج:

سیانوجن برومائڈ کلیویج کا استعمال N-ٹرمینل شروع کرنے والے امینو ایسڈ کو دور کرنے کے لیے کیا جاتا ہے، لیکن یہ زہریلا اور کم مخصوصیت کے مسائل کا باعث بنتا ہے۔ ڈائلیسس، الٹرا فلٹریشن، یا سائز کے اخراج کی کرومیٹوگرافی کے ذریعے، بفر ایکسچینج بعد کے آپریشنز کی تیاری میں نقصان دہ ریجنٹس کو ہٹاتا ہے۔

کرومیٹوگرافک طہارت اور ترسیب:

انسولین کو پاک کرنے کے لیے متعدد کرومیٹوگرافک تکنیکوں کا استعمال کیا جاتا ہے، بشمول افینیٹی کرومیٹوگرافی، آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی، ریورسڈ فیز کرومیٹوگرافی، ہائیڈروفوبک انٹریکشن کرومیٹوگرافی، اور سائز کو خارج کرنے والی کرومیٹوگرافی۔ بارش کے طریقے، جیسے پی ایچ ورن اور زنک کرسٹلائزیشن، نجاست کو دور کرنے اور پروٹین کو مرکوز کرنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں۔

تجدید کاری:

ڈسلفائیڈ بانڈز اور پروٹین فولڈنگ کی صحیح تشکیل کو فروغ دینے کے لیے حل شدہ پروٹین کو رینیچریشن بفر میں پتلا کیا جاتا ہے۔ پروٹین فولڈنگ مائع کرومیٹوگرافی اور ڈائلیسس بھی رینیچریشن کے لیے استعمال کیے جانے والے طریقے ہیں۔

انزیمیٹک کلیویج اور فارمولیشن:

Trypsin اور carboxypeptidase B کا استعمال C-peptide کو صاف کرنے کے لیے کیا جاتا ہے، جس سے فعال انسولین ہیٹروڈیمر بنتا ہے۔ آخر میں، ایک مستحکم فارمولیشن تیار کرتے ہوئے، بقایا نمکیات اور بفروں کو ہٹانے کے لیے کرسٹلائزیشن اور لائوفیلائزیشن کا استعمال کیا جاتا ہے۔ مختلف طبی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے مخصوص اضافی اشیاء (جیسے زنک اور پروٹامین) شامل کیے جاتے ہیں۔

نتیجہ:

سے انسولین کی ڈاؤن اسٹریم پروسیسنگ E. کولی پیچیدہ ہے. مستقبل کی توجہ طلب کو پورا کرنے اور لاگت کو کم کرنے کے لیے موثر، اقتصادی پیداوار کے لیے ان اقدامات کو بہتر بنانے پر مرکوز ہونی چاہیے۔

Yaohai Bio-Farma بھی فعال طور پر ادارہ جاتی یا انفرادی عالمی شراکت داروں کی تلاش میں ہے اور صنعت میں سب سے زیادہ مسابقتی معاوضہ پیش کرتا ہے۔ اگر آپ کے کوئی سوالات ہیں، تو براہ مہربانی بلا جھجھک ہم سے رابطہ کریں: [email protected]