IVT mRNA تیاری

لیب کے درمیان ترانسکرپشن (IVT) ایک ہیں پسندیدہ طریقہ جو mRNA کے لئے تیاری کے لئے استعمال ہوتا ہے، جو لا بوریٹری سکیل پر مائیکروگرام سے لے کر ملیگرام تک mRNA حاصل کرنے میں قابل ہے۔ تحقیقی مقاصد کے لئے، ریجنٹ فراہم کنندگان نے مرنا کے معقول لمبائی کے لئے (1000-4000 نیوکلیوٹائڈ) مناسب IVT ریکشن سسٹمز تیار کیے ہیں۔

اس مضمون میں، ہم mRNA کی لیب کے درمیان ترانسکرپشن (IVT) کا خلاصہ دینے والے ہیں، جس میں عادی IVT ریکشن سسٹم شامل ہے جو لا بوریٹری سکیل پر استعمال ہوتا ہے اور اتری لمبائی کے mRNA (>9000 نیوکلیوٹائڈ) کے لئے مناسب IVT ریکشن سسٹم۔

کٹس کو-ترانسکرپشنل کیپنگ کیپنگ کے ساتھ CleanCap AG اور m1ψ کے ساتھ انمنوجینیٹی کو کم کرنے میں مدد دیتے ہیں۔ DNase I باقی رہنے والی ڈی این اے کو ہٹانے کے لئے استعمال ہوتا ہے۔ کم پیداواری غلط مخلوط کرنے، ریجنٹ آکسیڈیشن یا ڈی این اے ٹیمپلیٹ کے مسائل کی وجہ سے ہوسکتی ہے، جسے سینٹریفیوژن، تازہ ریجنٹس، کنٹرولز اور ٹیمپلیٹ مقدار/ریکشن وقت کو ضبط کرنے سے مٹایا جا سکتا ہے۔

یاواہائی بائیو فارما مختلف پری فیبریکیٹڈ آئی وی ٹی آر این اے من<small>ز</small>یم (مایدہ/فریز ڈائر پاؤڈر) اور ایل این پی فنished پروڈکٹس فراہم کرتی ہے، جو پروٹینز جیسے فلوئریشینگ پروٹینز (eGFP، mCHERRY)، لو سفیریز، ریکامائنیٹ کری اور اینٹی جین OVA کو انکوڈنگ کرتی ہیں، تاکہ مختلف تجرباتی یا پروجیکٹ کی ضرورتیں پوری ہوسکیں۔

اولٹرا لمبے آر این اے کے لئے آئی وی ٹی سسٹم

معمولی آئی وی ٹی ممکن ہے کہ اسکے لئے کام نہیں کرے (>9000 nt). آئی وی ٹی کے ماحول کی عقلانی طور پر ترمیم اور گہری سمجھ کی ضرورت ہوتی ہے۔

ڈی این اے ٹیمپلیٹ: خطی شدہ پلاسمڈس یا PCR پrouducts کے ساتھ مطابق پروموٹر توالیں، جو RNase مکفی H2O میں حل ہوتی ہیں۔ انتہائی آئی وی ٹی شرائط کے لئے ڈی این اے ٹیمپلیٹ کی تراکم سے زیادہ 40 nM تجویز کی جاتی ہے۔

DTT: ترجمانی کے دوران انزایم کی سرگرمی کو حفظ کرتا ہے۔ انتہائی انزایم کی سرگرمی کے لئے ریکشن بافر میں فرش دی ٹی ٹی شامل کیا جانا چاہئے۔

RNase انہیبٹر: RNase کی سرگرمی کو روکتا ہے اور آر این اے کی ثبات کو حفظ کرتا ہے۔

T7 RNA پالیمریز: ڈی این اے کو ٹرانسکرپشن میں آر این اے میں تبدیل کرتا ہے، جو پروموٹر سیکوئنس کے مطابق ہوتا ہے۔ ٹی 7 آر این اے پولیمریز کی سرگرمی کو پی ایچ اور میگنیشیم آئنز کے ذریعے متاثر کیا جا سکتا ہے۔

میگنیشیم آئنز (Mg2+): آر این اے پولیمریز کے لیے ایک کو فیکٹر۔ بہت کم تراکیب سرگرمی کو کم کرتی ہیں، جبکہ بہت زیادہ تراکیب RNA کو نقصان پہنچاتی ہیں۔ مفت [Mg2+] کو نیوکلیوٹائید کی تراکیب کے بنیاد پر متعارف کیا جانا چاہیے۔ ہر نیوکلیوٹائید ایک [Mg2+] کو چیلیٹ کرتی ہے، لہذا [Mg2+] کی تراکیب کو نیوکلیوٹائید کی کل تراکیب سے زیادہ رکھنا چاہیے۔

نیوکلیوسائیڈ ٹرایفسفیٹس (NTP): سبسٹریٹ کے طور پر، NTPs RNA کے بنیادی اکائی ہیں۔ 7 mM سے زیادہ NTP تراکیب mRNA پیداوار پر مثبت اثر وردگی دیتی ہیں۔

اسپرمسائین: DNA-انزائیم کمپلیکس کو مستحکم کرتا ہے اور ٹرانسکرپشن واکنشوں کو تشویق دیتا ہے؛ تاہم، بہت زیادہ تراکیب میں ممانعت کی اثرات ہوتی ہیں۔ موصوفہ اسپرمسائین کی تراکیب 1 اور 3 mM کے درمیان ہے۔

انارگانک پائرافوسفیٹیز (PPase): آئی وی ٹی ریکشنز میں شامل کیا جاتا ہے تاکہ انارگنک پائیرو فوسفیٹ آئونز (PPi) کا اکٹھانا روکا جا سکے، ان کی Mg2+ ساتھ چیلیشن سے بچایا جا سکے اور کافی فری Mg2+ کا یقین حاصل ہو۔

پیشگام تکنالوجی اور آئی وی ٹی ایم آر این اے کی تجربہ کاری کو استعمال کرتے ہوئے، یاؤہائی بائیو-فارما ایک گھٹنا دار آئی وی ٹی آر این اے سروس فراہم کرتا ہے، جس میں سیکوئنس ڈیزائن، آئی وی ٹی آر این اے پریپ (m1ψ مودز کے ساتھ)، آر این اے سائیکلائزیشن، پرائیسیشن، فریز ڈرائینگ، ایل این پی انکیپسلیشن اور کوالٹی ٹیسٹنگ شامل ہیں۔

ہم عالمی شرکاء یا انفرادی شرکاء تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ رقابتی Compensations پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کو کوئی سوال ہے تو ہمارے ساتھ تماس کریں: [email protected]