IVT mRNA کی تیاری

ان وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) mRNA کی تیاری کے لیے ایک ترجیحی طریقہ ہے، جو لیبارٹری کے پیمانے پر mRNA کے ملیگرام تک مائیکروگرام حاصل کرنے کے قابل ہے۔ تحقیقی مقاصد کے لیے، ریجنٹ سپلائرز نے متوسط ​​لمبائی (1000-4000 نیوکلیوٹائڈز) کے mRNA کے لیے موزوں ورسٹائل IVT ری ایکشن سسٹم تیار کیے ہیں۔

اس مضمون میں، ہم mRNA کی وٹرو ٹرانسکرپشن (IVT) میں خلاصہ کریں گے، بشمول لیبارٹری پیمانے پر استعمال ہونے والا روایتی IVT رد عمل کا نظام اور IVT رد عمل کا نظام الٹرا لانگ mRNA (>9000 نیوکلیوٹائڈز) کے لیے موزوں ہے۔

کٹس CleanCap AG کے ساتھ شریک ٹرانسکرپشن کیپنگ کو فعال کرتی ہیں اور m1ψ کے ساتھ امیونوجنیسیٹی کو کم کرتی ہیں۔ DNase I بقایا DNA کو ہٹاتا ہے۔ کم پیداوار ناقص اختلاط، ریجنٹ آکسیڈیشن، یا ڈی این اے ٹیمپلیٹ کے مسائل کی وجہ سے ہو سکتی ہے، جسے سینٹرفیوگریشن، تازہ ری ایجنٹس، کنٹرولز، اور ٹیمپلیٹ کی مقدار/رد عمل کے وقت کو ایڈجسٹ کرکے کم کیا جا سکتا ہے۔

Yaohai Bio-Farma مختلف تجرباتی یا پراجیکٹ کو پورا کرنے کے لیے پہلے سے تیار شدہ IVT RNA مصنوعات (مائع/فریز خشک پاؤڈر) اور LNP تیار شدہ مصنوعات، انکوڈنگ پروٹین جیسے فلوروسینٹ پروٹین (eGFP، mCHERRY)، luciferase، recombinase Cre، اور antigen OVA فراہم کرتا ہے۔ ضروریات

الٹرا لانگ ایم آر این اے کے لیے IVT سسٹم

روایتی IVT زیادہ لمبے mRNA (>9000 nt) کے لیے کام نہیں کر سکتا۔ IVT اجزاء کی گہری سمجھ اور عقلی ایڈجسٹمنٹ کی ضرورت ہے۔

ڈی این اے ٹیمپلیٹ: RNase فری H2O میں تحلیل شدہ لائنرائزڈ پلاسمیڈ یا اسی پروموٹر کی ترتیب کے ساتھ PCR مصنوعات۔ زیادہ سے زیادہ IVT حالات کے لیے 40 nM سے زیادہ DNA ٹیمپلیٹ کا ارتکاز تجویز کیا جاتا ہے۔

ڈی ٹی ٹی: نقل کے دوران انزائم کی سرگرمی کو برقرار رکھتا ہے۔ تازہ ڈی ٹی ٹی کو زیادہ سے زیادہ انزائم سرگرمی کے لیے ری ایکشن بفر میں شامل کیا جانا چاہیے۔

RNase Inhibitor: RNase سرگرمی کو روکتا ہے اور mRNA استحکام کو برقرار رکھتا ہے۔

T7 RNA پولیمریز: پروموٹر کی ترتیب کے مطابق ڈی این اے ٹرانسکرپشن کو آر این اے میں اتپریرک کرتا ہے۔ T7 RNA پولیمریز کی سرگرمی pH اور میگنیشیم آئنوں سے متاثر ہوتی ہے۔

میگنیشیم آئنز (Mg2+): RNA پولیمریز کے لیے ایک کوفیکٹر۔ بہت کم ارتکاز ٹرانسکرپشن کی کارکردگی کو کم کر دیتا ہے، جب کہ بہت زیادہ ارتکاز آر این اے کے انحطاط کا باعث بنتا ہے۔ مفت [Mg2+] کو نیوکلیوٹائڈ کی حراستی کی بنیاد پر ایڈجسٹ کیا جانا چاہئے۔ ہر نیوکلیوٹائیڈ ایک [Mg2+] کو چیلیٹ کرتا ہے، اس لیے [Mg2+] کا ارتکاز کل نیوکلیوٹائڈ کے ارتکاز سے زیادہ ہونا چاہیے۔

نیوکلیوسائیڈ ٹرائی فاسفیٹس (NTP): سبسٹریٹس کے طور پر، NTPs RNA کی بنیادی اکائیاں ہیں۔ 7 ایم ایم سے زیادہ این ٹی پی کی تعداد کا ایم آر این اے کی پیداوار پر مثبت اثر پڑتا ہے۔

Spermidine: ڈی این اے انزائم کمپلیکس کو مستحکم کرتا ہے اور نقل کے رد عمل کو متحرک کرتا ہے۔ تاہم، ضرورت سے زیادہ ارتکاز کے روکنے والے اثرات ہوتے ہیں۔ تجویز کردہ سپرمائڈائن کا ارتکاز 1 اور 3 mM کے درمیان ہے۔

غیر نامیاتی پائروفاسفیٹیس (PPase): غیر نامیاتی پائروفاسفیٹ آئنوں (PPi) کے جمع ہونے سے روکنے کے لیے IVT کے رد عمل میں شامل کیا گیا، Mg2+ کے ساتھ ان کے چیلیشن سے گریز اور کافی مفت Mg2+ کو یقینی بنانا۔

اہم ٹیکنالوجی اور IVT mRNA کے تجربے سے فائدہ اٹھاتے ہوئے، Yaohai Bio-Pharma ایک سٹاپ IVT RNA سروس فراہم کرتا ہے، جس میں ترتیب ڈیزائن، IVT RNA پریپ (m1ψ موڈز کے ساتھ)، RNA سائیکلائزیشن، پیوریفیکیشن، فریز ڈرائینگ، LNP انکیپسولیشن، اور کوالٹی ٹیسٹنگ شامل ہیں۔

ہم ادارہ جاتی یا انفرادی عالمی شراکت داروں کی بھی سرگرمی سے تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ مسابقتی معاوضہ پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کے کوئی سوالات ہیں، تو براہ مہربانی بلا جھجھک ہم سے رابطہ کریں: [email protected]