بڑے پیمانے پر جین کی ترکیب کے لیے اختراعی اسمبلی تکنیک

DNA کے بڑے ٹکڑوں کو شروع سے ترکیب کرنے کے لیے اسمبلی ٹیکنالوجی جین کی ترکیب کی بنیاد ہے، جس میں BioBrick™، TAR، BglBrick، گولڈن گیٹ، گبسن اسمبلی، CPEC، اور اوورلیپ PCR جیسے طریقوں کو شامل کیا گیا ہے۔ ایک ہی مرحلے میں جین کی لمبائی کے ڈی این اے کو درست طریقے سے ترکیب کرنے میں موجودہ ٹیکنالوجی کی حدود کی وجہ سے، حصوں میں ترکیب شدہ اولیگونوکلیوٹائڈ کے ٹکڑوں کو لمبے ڈی این اے کے ٹکڑوں میں جمع کرنے کے لیے وٹرو اور ویوو اسمبلی تکنیک کو یکجا کرنا ضروری ہے۔

وٹرو اسمبلی تکنیک میں

ان کو ٹکڑے کے سائز اور ترتیب کی خصوصیات کی بنیاد پر مختلف طریقوں میں درجہ بندی کیا جاتا ہے، جس میں ٹول انزائمز استعمال کرنے کی عام ضرورت ہوتی ہے۔ اوورلیپ پی سی آر، ڈی این اے پولیمریز کے طریقہ کار پر مبنی، کام میں آسان اور تیز ہے۔ BioBrick اور BglBrick طریقے، جو isoschizomers پر انحصار کرتے ہیں، معیاری اسمبلی کو فعال کرتے ہیں، حالانکہ BioBrick کا طریقہ فیوژن پروٹین کے لیے غیر موزوں ہے۔ گولڈن گیٹ کلوننگ کا طریقہ، قسم IIS پابندی کے خامروں پر مبنی، متعدد ٹکڑوں کے موثر ہموار بندھن کی اجازت دیتا ہے۔ گبسن اسمبلی کا طریقہ، جو متعدد ٹول انزائمز کے امتزاج کو استعمال کرتا ہے، کئی سو kb تک پہنچنے والے ٹکڑوں کے سائز کے ساتھ بغیر کسی رکاوٹ کے قابل بناتا ہے۔ ڈی این اے اجزاء کا معیاری ڈیزائن موجودہ ٹکڑوں کے استعمال کی شرح کو بڑھاتا ہے۔

Vivo اسمبلی کی تکنیکوں میں

اگرچہ وٹرو میں جمع شدہ ٹکڑے سائز میں کئی سو kb تک پہنچ سکتے ہیں، پیداوار اکثر ناکافی ہوتی ہے، جس کے لیے جانداروں کا استعمال کرتے ہوئے بڑھاوا دینے کی ضرورت ہوتی ہے جیسے ایسریچیا کولی 20 kb سے زیادہ کے ٹکڑوں کو جمع کرنے میں، حیاتیات کے اندر دوبارہ پیدا ہونے والے نظام کو اکثر استعمال کیا جاتا ہے، بشمول Bacillus subtilis، خمیر، اور انجینئرڈ بیکٹیریا۔ خمیر، ایک عام طور پر استعمال ہونے والے میزبان کے طور پر، کئی سالوں سے اس کی موثر ہم جنس بحالی کی صلاحیت کے لیے پہچانا جاتا ہے۔ اس کا استعمال مصنوعی کروموسوم کی لمبائی میں کئی میگا بیس (Mb) تک جمع کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے۔ مزید برآں، Saccharomyces cerevisiae کروموسوم کی لمبائی کے لیے غیر معمولی رواداری کا مظاہرہ کرتا ہے، جو اعلیٰ جانداروں میں الٹرا لمبے کروموسوم بنانے کے لیے خمیر کو استعمال کرنے کے لیے ایک نظریاتی بنیاد فراہم کرتا ہے۔

درخواستیں

یاوہائی بائیو فارما بنیادی طور پر جین کی ترکیب کے لیے اسمبلی کے دو طریقے استعمال کرتا ہے: لیگیس اسمبلی اور ڈی این اے پولیمریز اسمبلی۔ لیگیس اسمبلی کا طریقہ ڈی این اے لیگیس کا استعمال کرتے ہوئے اوورلیپنگ اور ہائبرڈائزڈ 5'-فاسفوریلیٹڈ اولیگونوکلیوٹائڈ ٹکڑوں کو ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے میں جوڑتا ہے۔ پولیمریز اسمبلی کا طریقہ ہائبرڈائزیشن کے ذریعے اوورلیپنگ اولیگونوکلیوٹائڈ کے ٹکڑوں کو بڑھانے کے لیے، مختلف لمبائیوں کا مرکب حاصل کرنے، اور آخر میں پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے کامیابی کے ساتھ جمع ہونے والے مکمل لمبائی کے ٹکڑوں کو بڑھانے کے لیے ڈی این اے پولیمریز کا استعمال کرتا ہے۔ Yaohai's گاہکوں کو جین کی ترکیب میں مخصوص ضروریات کو پورا کرنے میں مدد کر سکتا ہے۔

ہم ادارہ جاتی یا انفرادی عالمی شراکت داروں کی بھی سرگرمی سے تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ مسابقتی معاوضہ پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کے کوئی سوالات ہیں، تو براہ مہربانی بلا جھجھک ہم سے رابطہ کریں: [email protected]