فیڈ-باتچ فیرمینگ کے استراتیجی طاقت کا استعمال

پیچیا پاسٹورس مختلف غیر ملکی پروٹینز کے تولید میں وسیع طور پر استعمال ہوتی ہے۔ فیڈ بیچ فیڈنگ کے ذریعے عمل میں لایی گئی High-Cell-Density Fermentation (HCDF) ٹیکنالوجی نے بائوفارمیسیوٹیکلز اور صنعتی آنزائیم کے بڑے پیمانے پر تولید میں کامیابی حاصل کی ہے۔ دقت سے کنٹرول شدہ مدیا میں HCDF ٹیکنالوجی کا استعمال کرتے ہوئے، بالقوه، زیادہ فعالیت والے اور لاگت سے مناسب ریکومبنٹ پروٹینز حاصل کیے جا سکتے ہیں۔

حالیہ تحقیق ظاہر کرتی ہے کہ HCDF کی رstrupیوں کے ذریعے پیچیا پاسٹورس میں غیر ملکی پروٹینز کی تولید اور فعالیت میں بہتری کے لئے کوشش کی جا رہی ہے۔ HCDF ٹیکنالوجی کے ذریعے معین مدیا میں بلند سطح کے سیل کلاسٹرز کو حاصل کرنے میں آسانی حاصل ہوتی ہے، جس سے HCDF کے ذریعے فعالیت میں بہتری اور لاگت میں کمی کے ساتھ وفیض ریکومبنٹ پروٹینز حاصل کیے جا سکتے ہیں۔ تاہم، پیچیا پاسٹورس میں خاص پروٹینز کی بلند سطحی عبارت کو بہتر بنانے کے لئے مناسب HCDF رstrupی کا انتخاب ابھی بھی ایک چیلنجر ہے۔

High-Cell-Density Fermentation (HCDF)

پیشیا پاسٹورس غیر ملکی پروٹین تولید میں بہترین ہوتی ہے، خودکار بائیو ریکٹرز میں HCDF کے لئے منتخب کی جاتی ہے۔ HCDF میں تین مرحلے ہوتے ہیں: گلائسرول بیچ، فیڈنگ اور میتھانول انڈکشن۔ یاؤہائی بائیو-فارما دس سالوں سے زیادہ مicrobial فریمینٹیشن میں تجربہ رکھتا ہے اور ناگزیر 400 پروجیکٹس کی خدمات فراہم کی ہیں۔ کمپنی کے پاس وسیع تجربہ اور خوب ترقی یافتہ تکنالوجی ہے، جو اسے مختلف HCDF استراتیجیوں کو استعمال کرنے کی صلاحیت دیتی ہے تاکہ پروٹین تولید کی کارآمدی میں 개선 کیا جا سکے۔

میتھانول AOX1 کا انڈائر اور کاربن سرچین کے طور پر کام کرتا ہے، لیکن اس کی تراکم کو مسمومیت سے روکنے کے لئے کنٹرول کیا جانا چاہیے۔ پیشیا پاسٹورس کے رشد اور پروٹین اظہار کو بہتر بنانے کے لئے مختلف میتھانول فیڈنگ استراتیجیوں کو جائزہ لینا ضروری ہے۔

میتھانول انڈکشن استراتیجی

فیڈ بیچ ایچ سی ڈی ایف میتھینال انڈکشن استریٹیجی میں، ریاست پر مبنی انڈکشن استریٹیجز کنٹرول ماہیت کے ایک سیٹ کو شامل کرتی ہیں جو آن لائن/آف لائن یا فور وارڈ/برس وارڈ کنٹرول کے ذریعے میتھینال کی مکمل تجویز کو منظم کرتی ہیں۔ شماریاتی انڈکشن استریٹیجز میں، اہم استریٹیجز میں μ-stat، دسولوڈ آکسیجن (DO)-stat، میتھینال-stat اور بائiomass-stat شامل ہیں۔

1.1 μ-stat

μ-stat استریٹیجی μ کی کنٹرول کے ذریعے زندگی کے مواد کو ثابت رکھتی ہے، جو بازیابی کو مدد دیتی ہے اور پروٹین اظہار پر μ کے اثر کو مطالعہ کرتی ہے۔ تاہم، یہ میتھینال اور DO کی مستقیم کنٹرول کی کامیابی نہیں حاصل کرتی، جو تجمع اور ROS تولید کا خطرہ ہے۔

1.2 DO-stat

ڈی او اسٹیٹریجی خودکارانہ طور پر میتھانول فیڈ کو ذوبیدہ اکسیجن کنٹرول کرتے ہوئے اکسیجن کو حفظ کرنے کے لئے استعمال کی جاتی ہے، لیکن یہ میتھانول کی تراکم اور رُشد کی شرح کو ثابت نہیں کرتی، جو پروٹین اظہار کی تحقیق پر اثر انداز ہوسکتی ہے۔ اکسیجن کا حفظ هوائی فریمینٹیشن میں چیلنجر پیش کرتا ہے، اور جبکہ صاف اکسیجن کی سپلی مگر مہنگی اور زہریلوں کی ہوسکتی ہے، پریشر کو بڑھانا ایک زیادہ معقول رویہ ہے جو پروٹین کی سرگرمی کو بھی بڑھانا ممکن بناتا ہے۔

1.3 میتھانول-اسٹیٹ

میتھانول کی تراکم کے کنٹرول میں کمی دونوں μ-اسٹیٹ اور ڈی او اسٹیٹ کی راہیوں کو محدود کرتی ہے۔ میتھانول کی آماری راہیں، جو ایک on/off mode میں کام کرتی ہیں، اضطراب کے عرضہ ہوتی ہیں اور دقت کی کمی ہوتی ہے۔ مخالف طور پر، PID کنٹرولرز میتھانول کی تراکم کو زیادہ دقت سے کنٹرول کرتے ہیں، جو فریمینٹیشن کی کلیہ کارکردگی کو بہتر بناتا ہے۔

1.4 باiomass-اسٹیٹ

بائیومیس-استیٹریجی ریلیشن شپ کو بائیومیس اور میتھینال فیڈنگ کے درمیان تعریف کرتی ہے، میتھینال فیڈنگ ریٹ کو ماکسimum پروٹین آؤٹ پٹ حاصل کرنے کے لئے مناسب بناتی ہے۔ بائیومیس کی آن لائن نگرانی زیادہ عملی ہے، جہاں فلو سایٹومیٹری انتخابی طریقہ ہے۔ 1000L سکیل پر، میتھینال فیڈنگ ریٹ کو مناسب بنانا انزایم کی سودمندی، آؤٹ پٹ اور پروڈکٹیوٹی میں معنوی طور پر اضافہ کرتا ہے، جو فلاسک فرمینٹیشن کو دوبارہ کرتا ہے۔

مشترکہ فیڈنگ استریٹیجی

گلیسرول، ایک AOX1 پروموٹر انہیبٹر کے طور پر، میتھینال انڈکشن سے پہلے پوری طرح سے خرچ کر لیا جانا چاہیے تاکہ پروٹین پیداوار کو روکنے سے باز نہ رہے۔ مشترکہ ذرات انزایم کی سودمندی میں اضافہ کر سکتی ہیں لیکن زیادہ گلیسرول کی وجہ سے نمونے اور عبارت میں ضرر ہوسکتی ہے۔ سوربیٹول، ایسکوربیک ایسڈ، مینیٹول اور دوسرے گلیسرول کی جگہ لے سکتے ہیں، پروٹیولیسیس اور پرورش وقت کو کم کرتے ہوئے اور پروٹین عبارت کو بہتر بناتے ہوئے۔

ٹین شدہ بانک کو مناسب محفوظ رکھنے کی طریقہ العمل اپنا کرنے اور اسے اچھے حالات میں رکھنے کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ ٹین کی خصوصیات کی ثبات برقرار رہے۔ یاؤہائی بائیو فارم ایسے مطلوبات پورے کرسکتا ہے جو گلائسرول سٹاک محفوظ رکھنے (اولٹرا-نیچل درجہ حرارت والے فریزرز یا مائع نیٹروجن کے ذریعے) اور خمیر اور ای۔ کالی کے فreeze-drying محفوظ رکھنے کے لئے ہوتے ہیں۔

محرمانہ شرائط کا استراتیجی استعمال

پچیا پاسٹورس میں، محدود شرائط جیسے کم DO، میتھینال کی تعداد، اور آکسیجن کمی، دوبارہ بنایا گیا پروٹین کی ظاہر کو بڑھاتی ہیں۔ آکسیجن کی کمی کے ذریعے AOX1 پروموٹر کو فعال کرتی ہے، جو پروٹین کی تولید میں اضافہ کرتی ہے اور گرمی کو کم کرتی ہے۔ نیچی درجہ حرارت کی انڈکشن پروڈکشن، سرگرمی، ثبات اور سیل کی زندگی کو بڑھاتی ہے لیکن سردی کے خرچ میں شامل ہوتی ہے۔ pH اور نائٹروجن کی کمی بھی ظاہر کو مدد دیتی ہیں، جس کے لئے عملی مشکلات سے باز روکنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ نائٹروجن کی کمی خاص طور پر پروٹین کی تولید کو بڑھاتی ہے۔

یاوہائی بائیو فارما عالمی شرکتیں یا انفرادی شریک تلاش کر رہی ہے اور صنعت میں سب سے متنافسی دستخط پیش کرتی ہے۔ اگر آپ کو کسی سوال یا مسئلہ ہو تو مکمل طور پر ہمارے ساتھ رابطہ کریں: [email protected]