فیڈ بیچ ابالنے کی حکمت عملی کی طاقت کو استعمال کرنا

Pichia pastoris وسیع پیمانے پر مختلف heterologous پروٹین کی پیداوار میں استعمال کیا جاتا ہے. ہائی-سیل-ڈینسٹی فرمینٹیشن (HCDF) ٹیکنالوجی، جو Fed-Batch فیڈنگ کے ذریعے لاگو کی گئی ہے، نے کامیابی سے بائیو فارماسیوٹیکلز اور صنعتی خامروں کی بڑے پیمانے پر پیداوار حاصل کی ہے۔ درست طریقے سے کنٹرول شدہ میڈیا میں، HCDF ٹیکنالوجی کے استعمال سے زیادہ پیداوار، زیادہ سرگرمی، اور لاگت سے موثر ریکومبیننٹ پروٹین حاصل کیے جا سکتے ہیں۔

حالیہ تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ ایچ سی ڈی ایف کی حکمت عملیوں کے ذریعے، پچیا پیسٹوریس میں ہیٹرولوگس پروٹین کی پیداوار اور سرگرمی کو بڑھانے کی کوشش کی جا رہی ہے۔ ایچ سی ڈی ایف ٹکنالوجی متعین میڈیا میں اعلی سطحی سیل کلسٹرز کے آسانی سے حصول کی اجازت دیتی ہے، اس طرح ایچ سی ڈی ایف کے ذریعے بہتر سرگرمی اور کم لاگت کے ساتھ وافر ریکومبیننٹ پروٹین کے حصول کو قابل بناتا ہے۔ تاہم، Pichia pastoris میں مخصوص پروٹین کے اعلیٰ سطحی اظہار کو بہتر بنانے کے لیے HCDF کی مناسب حکمت عملی کا انتخاب ایک چیلنج بنی ہوئی ہے۔

ہائی سیل ڈینسٹی فرمینٹیشن (HCDF)

Pichia pastoris heterologous پروٹین کی پیداوار میں بہترین ہے، جو خود کار بائیو ری ایکٹرز میں HCDF کے لیے پسندیدہ ہے۔ HCDF کے 3 مراحل ہیں: گلیسرول بیچ، کھانا کھلانا، اور میتھانول شامل کرنا۔ Yaohai Bio-Pharma مائکروبیل فرمینٹیشن میں ایک دہائی سے زیادہ کا تجربہ رکھتا ہے اور اس نے 400 سے زیادہ پروجیکٹس پر کام کیا ہے۔ کمپنی کے پاس وسیع مہارت اور اچھی طرح سے ترقی یافتہ ٹیکنالوجی ہے، جو اسے پروٹین کی پیداوار کی کارکردگی کو بہتر بنانے کے لیے مختلف HCDF حکمت عملیوں کو استعمال کرنے کے قابل بناتی ہے۔

میتھانول AOX1 اور کاربن کے ماخذ دونوں کے طور پر کام کرتا ہے، لیکن زہریلا کو روکنے کے لیے اس کے ارتکاز کو کنٹرول کرنا ضروری ہے۔ Pichia pastoris اور پروٹین کے اظہار کی نشوونما کو بہتر بنانے کے لیے مختلف میتھانول کھانا کھلانے کی حکمت عملیوں کا جائزہ لینا بہت ضروری ہے۔

میتھانول شامل کرنے کی حکمت عملی

فیڈ-بیچ ایچ سی ڈی ایف میتھانول انڈکشن حکمت عملی میں، ریاست پر مبنی انڈکشن حکمت عملی کنٹرول کے طریقوں کا ایک سیٹ شامل کرتی ہے جو آن لائن/آف لائن یا فارورڈ/ریورس کنٹرول کے ذریعے میتھانول کے اضافی اضافے کو منظم کرتی ہے۔ شماریاتی شامل کرنے کی حکمت عملیوں میں، اہم میں μ-stat، تحلیل شدہ آکسیجن (DO)-stat، methanol-stat، اور biomass-stat شامل ہیں۔

1.1 μ-stat

μ-stat حکمت عملی μ کو کنٹرول کرکے، تولیدی صلاحیت میں مدد دے کر، اور پروٹین کے اظہار پر μ کے اثر کا مطالعہ کرکے بایوماس کو مستحکم رکھتی ہے۔ تاہم، اس میں براہ راست میتھانول اور ڈی او کنٹرول کا فقدان ہے، جس سے جمع ہونے اور ROS پیدا کرنے کا خطرہ ہے۔

1.2 DO-stat

DO-stat حکمت عملی آکسیجن کو برقرار رکھنے کے لیے تحلیل شدہ آکسیجن کو کنٹرول کر کے میتھانول فیڈ کو بالواسطہ طور پر کنٹرول کرتی ہے، لیکن یہ میتھانول کے ارتکاز اور شرح نمو کو ٹھیک نہیں کرتی، جو پروٹین کے اظہار کے مطالعہ کو متاثر کر سکتی ہے۔ ایروبک ابال میں آکسیجنشن ایک چیلنج ہے، اور جب کہ خالص آکسیجن کی تکمیل مہنگا اور زہریلا ہو سکتا ہے، دباؤ میں اضافہ ایک زیادہ اقتصادی طریقہ ہے جو پروٹین کی سرگرمی کو بھی بڑھا سکتا ہے۔

1.3 میتھانول اسٹیٹ

میتھانول کے ارتکاز کا ناکافی کنٹرول μ-stat اور DO-stat دونوں حکمت عملیوں کے لیے حدود پیدا کرتا ہے۔ میتھانول شماریاتی حکمت عملی، جو آن/آف موڈ میں کام کرتی ہیں، اتار چڑھاو کا شکار ہیں اور درستگی کی کمی ہے۔ اس کے برعکس، پی آئی ڈی کنٹرولرز میتھانول کے ارتکاز کا زیادہ درست ضابطہ پیش کرتے ہیں، مجموعی طور پر ابال کی تاثیر کو بڑھاتے ہیں۔

1.4 بایوماس اسٹیٹ

بائیو ماس اسٹیٹ کی حکمت عملی بائیو ماس اور میتھانول فیڈنگ کے درمیان تعلق کی وضاحت کرتی ہے، پروٹین کی پیداوار کو بڑھانے کے لیے میتھانول فیڈنگ کی شرح کو بہتر بناتی ہے۔ بایوماس کی آن لائن نگرانی زیادہ عملی ہے، جس میں بہاؤ سائٹومیٹری ترجیحی طریقہ ہے۔ 1000L پیمانے پر، میتھانول فیڈنگ کی شرح کو بہتر بنانے سے انزائم کی سرگرمی، پیداوار، اور پیداواری صلاحیت میں نمایاں بہتری آتی ہے، جو فلاسک کے ابال کو بہتر بناتا ہے۔

شریک خوراک کی حکمت عملی

Glycerol، AOX1 پروموٹر روکنے والے کے طور پر، پروٹین کی پیداوار کو دبانے سے بچنے کے لیے میتھانول شامل کرنے سے پہلے مکمل طور پر استعمال کیا جانا چاہیے۔ کو-سبسٹریٹس انزائم کی سرگرمی کو بڑھا سکتے ہیں لیکن اضافی گلیسرول ترقی اور اظہار کو نقصان پہنچا سکتا ہے۔ Sorbitol، ascorbic acid، mannitol، اور دیگر گلیسرول کی جگہ لے سکتے ہیں، پروٹولیسس اور کاشت کے وقت کو کم کرتے ہیں، اور پروٹین کے اظہار کو بڑھا سکتے ہیں۔

سٹرین بینک کو سٹرین خصوصیات کے استحکام کو برقرار رکھنے کے لیے مناسب تحفظ کے طریقے اور مناسب ماحول میں جگہ کا تعین کرنے کی ضرورت ہے۔ Yaohai Bio-Farma گلیسرول اسٹاک کے تحفظ کی ضروریات کو پورا کر سکتا ہے (انتہائی کم درجہ حرارت کے فریزر یا مائع نائٹروجن کے ذریعے) اور خمیر اور ای کولی کے منجمد خشک کرنے والے تحفظ کے لیے۔

پابندی کی حوصلہ افزائی کی حکمت عملی

Pichia pastoris میں، محدود حالات جیسے کم DO، میتھانول کا ارتکاز، اور آکسیجن کی حد دوبارہ پیدا ہونے والے پروٹین کے اظہار کو بڑھاتی ہے۔ آکسیجن محدود حالات میتھانول کے جمع ہونے کے ذریعے AOX1 پروموٹر کو چالو کرتے ہیں، گرمی کو کم کرتے ہوئے پروٹین کی پیداوار کو بڑھاتے ہیں۔ کم درجہ حرارت انڈکشن پیداوار، سرگرمی، استحکام، اور سیل کی عملداری کو بڑھاتا ہے لیکن ٹھنڈک کے اخراجات میں اضافہ کرتا ہے۔ پی ایچ اور نائٹروجن کی حد بھی اظہار میں مدد کرتی ہے، آپریشنل مسائل سے بچنے کے لیے احتیاط کی ضرورت ہوتی ہے۔ نائٹروجن کی حد خاص طور پر مخصوص پروٹین کی پیداواری صلاحیت کو بڑھاتی ہے۔

Yaohai Bio-Farma بھی فعال طور پر ادارہ جاتی یا انفرادی عالمی شراکت داروں کی تلاش میں ہے اور صنعت میں سب سے زیادہ مسابقتی معاوضہ پیش کرتا ہے۔ اگر آپ کے کوئی سوالات ہیں، تو براہ مہربانی بلا جھجھک ہم سے رابطہ کریں: [email protected]